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Tg(mpl:eGFP)smu4,動(dòng)物試驗(yàn)

原創(chuàng)發(fā)布者:北檢院    發(fā)布時(shí)間:2023-02-24     點(diǎn)擊數(shù):

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注意:因業(yè)務(wù)調(diào)整,暫不接受個(gè)人委托測(cè)試望見(jiàn)諒。

基本信息

品系名稱:Tg(mpl:eGFP)smu4

英文名稱:Tg(mpl:eGFP)smu4

疾病名稱:NA

相關(guān)基因:i

背景品系:AB

遺傳類型:染色體顯性遺傳

繁殖方式:側(cè)交

繁殖代數(shù):第5代

研究用途:用于血小板生成,血小板相關(guān)疾病病理機(jī)制的研究以及藥物評(píng)估篩選。

飼養(yǎng)環(huán)境:斑馬魚(yú)養(yǎng)殖系統(tǒng),28.5℃

培育單位:南方醫(yī)科大學(xué)

保種單位:華南理工大學(xué)醫(yī)學(xué)院

資源鑒定:已通過(guò)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型鑒定與評(píng)價(jià)工作委員會(huì)鑒定

鑒定日期:2020-05-02 00:00:00

特征描述

1. Tg(mpl:eGFP)smu4轉(zhuǎn)基因系斑馬魚(yú)的表達(dá)譜

mpl-GFP陽(yáng)性(mpl:eGFP +)細(xì)胞(血小板及血小板前體細(xì)胞)在波長(zhǎng)488的激發(fā)光照射下發(fā)出綠色熒光,可以在熒光顯微鏡下直接觀察與計(jì)數(shù)。

mpl:eGFP+ 細(xì)胞與mpl的WISH(原位雜交染色)染色結(jié)果類似,約40hpf時(shí)從主動(dòng)脈-性腺-中腎(AGM)和CHT區(qū)出現(xiàn),隨后在CHT和循環(huán)中迅速增加,從2dpf出現(xiàn)在血液循環(huán)中,從8dpf開(kāi)始逐漸減少,最后在11dpf左右時(shí)熒光消失。(如圖2所示)。

2. Tg(mpl:eGFP)smu4轉(zhuǎn)基因系斑馬魚(yú)的組織特異性

免疫組化抗體染色實(shí)驗(yàn)顯示,mpl:eGFP表達(dá)既不與髓樣細(xì)胞(Lcp1+)重疊也不與紅細(xì)胞(Hbae1+)重疊,但與少量gata1+紅系前體細(xì)胞(gata1:DsRed+)重疊(圖3), 說(shuō)明mpl:eGFP陽(yáng)性細(xì)胞特異性標(biāo)記gata1細(xì)胞衍生的血小板,不標(biāo)記髓系細(xì)胞和紅系細(xì)胞。

3. Tg(mpl:eGFP)smu4斑馬魚(yú)限定為血小板細(xì)胞的表型

比較mpl:eGFP和cd41:eGFP細(xì)胞群,mpl:eGFP陽(yáng)性細(xì)胞群中的血小板標(biāo)記基因cd42akif1b,lrrc32nfe表達(dá)量更高,說(shuō)明mpl:eGFP比cd41:eGFP更特異地標(biāo)記了血小板(圖4 A)。mpl:eGFP 主要(約90%)標(biāo)記細(xì)胞質(zhì)稀少且細(xì)胞核濃縮的血小板細(xì)胞和血小板前體細(xì)胞,而cd41:eGFP細(xì)胞卻含有一小部分(30%)與HSPC對(duì)應(yīng)的較大細(xì)胞(圖4 B-D)。

4. mpl:eGFP陽(yáng)性細(xì)胞為有功能的血小板細(xì)胞

Tg(mpl:eGFP)smu4斑馬魚(yú)的血管損傷后,循環(huán)中的mpl:eGFP+細(xì)胞可以到達(dá)傷口并發(fā)生凝結(jié)堵塞傷口(如圖5所示)。

5. mpl:eGFP陽(yáng)性細(xì)胞受血小板生成信號(hào)通路調(diào)控

Tg(mpl:eGFP)smu4斑馬魚(yú)中過(guò)表達(dá)tpo的mRNA,血液中CHT造血區(qū)的mpl:eGFP+陽(yáng)性細(xì)胞的表達(dá)會(huì)顯著增加。在Tg(mpl:eGFP)smu4斑馬魚(yú)中導(dǎo)入注射用的重組人IL-11,mpl:eGFP+細(xì)胞的表達(dá)也顯著增加(如圖6所示)。

動(dòng)物簡(jiǎn)介

Tg(mpl:eGFP)smu4是特異性標(biāo)記血小板的轉(zhuǎn)基因系斑馬魚(yú),特異性將血小板細(xì)胞標(biāo)記為明亮的綠色熒光細(xì)胞,而幾乎不標(biāo)記造血干祖細(xì)胞和其他造血譜系的細(xì)胞。(如圖1所示)

營(yíng)養(yǎng)成分

斑馬魚(yú)是雜食性動(dòng)物,成年魚(yú)每天投喂2到3次,喂食量以5分鐘左右吃完為佳。本實(shí)驗(yàn)室常用魚(yú)食有鹽水蝦和固體顆粒魚(yú)食。

生物學(xué)特性

暫無(wú)介紹

遺傳信息

mpl啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)GFP綠色熒光蛋白,本轉(zhuǎn)基因系中的mpl啟動(dòng)子為mpl基因(ID:ENSDARG00000039222)轉(zhuǎn)錄本上游的4651bp區(qū)域。

實(shí)驗(yàn)儀器

實(shí)驗(yàn)室儀器 實(shí)驗(yàn)室儀器 實(shí)驗(yàn)室儀器 實(shí)驗(yàn)室儀器

測(cè)試流程

Tg(mpl:eGFP)smu4,動(dòng)物試驗(yàn)流程

注意事項(xiàng)

1.具體的試驗(yàn)周期以工程師告知的為準(zhǔn)。

2.文章中的圖片或者標(biāo)準(zhǔn)以及具體的試驗(yàn)方案僅供參考,因?yàn)槊總€(gè)樣品和項(xiàng)目都有所不同,所以最終以工程師告知的為準(zhǔn)。

3.關(guān)于(樣品量)的需求,最好是先咨詢我們的工程師確定,避免不必要的樣品損失。

4.加急試驗(yàn)周期一般是五個(gè)工作日左右,部分樣品有所差異

5.如果對(duì)于(Tg(mpl:eGFP)smu4,動(dòng)物試驗(yàn))還有什么疑問(wèn),可以咨詢我們的工程師為您一一解答。

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