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基本信息

品系名稱：B6-Tg(hNCR3)小鼠

英文名稱：B6-Tg(hNCR3) mouse

疾病名稱：傳染病、腫瘤

相關(guān)基因：hNCR3

背景品系：C57BL/6J

遺傳類型：基因敲除

繁殖方式：HET X WT

繁殖代數(shù)：NA

研究用途：用于研究傳染性疾病、腫瘤等及信號轉(zhuǎn)導(dǎo)方面的研究。

飼養(yǎng)環(huán)境：屏障或隔離環(huán)境

培育單位：北京華阜康生物科技股份有限公司、中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)實(shí)驗動物研究所

保種單位：中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)實(shí)驗動物研究所

資源鑒定：否

鑒定日期：暫無介紹

特征描述

NKp30 的發(fā)現(xiàn)及分子結(jié)構(gòu)

1999 年 Pende 等發(fā)現(xiàn)了 NKp30 受體（NCR3；CD337），是由人類 6 號染色體 HLAIII 區(qū)的 1C7 基因編碼的一種大小為 30 kDa的蛋白質(zhì)，這種受體選擇性的表達(dá)在所有的 NK 細(xì)胞表面，因此可以作為分離 NK 細(xì)胞的標(biāo)記物。此外，與IL-15 接觸后，NKp30 還可在臍帶血 T 細(xì)胞上表達(dá)，并且受到孕酮刺激后可表達(dá)在子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞表面。NKp30是免疫球蛋白超家族的一員，為 I 型跨膜糖蛋白，包含一個細(xì)胞外免疫球蛋白域，負(fù)責(zé)配體結(jié)合，一個帶陽性電荷精氨酸殘基的跨膜域以及一個沒有附加信號域的胞內(nèi)域。CD3ζ 同質(zhì)二聚體和 CD3ζ/FcRγ 異質(zhì)二聚體可與 NKp30 跨膜區(qū)的帶電精氨酸結(jié)合，并介導(dǎo)NK 細(xì)胞的活化。研究發(fā)現(xiàn) NK 細(xì)胞表面有 6 種不同的 NKp30 剪切變異體，其中 NKp30a-c的胞外區(qū)為 v 型樣區(qū)，而另 3 個 NKp30d-f 的胞外區(qū)為c 型 Ig 樣區(qū)；基因表達(dá)時翻譯外顯子的不同導(dǎo)致了各種剪切變異體間胞內(nèi)域的不同。其中 V 型樣區(qū)的 NKp30 亞型占總體的大多數(shù)，并且各種剪切變異體在不同組織間的分布亦表現(xiàn)不同。Delahaye等通過研究轉(zhuǎn)染了 3 種不同 V 型樣區(qū) NKp30 的NKL 細(xì)胞發(fā)現(xiàn)不同亞型會導(dǎo)致 NK 細(xì)胞做出不同的應(yīng)答；轉(zhuǎn)染了 NKp30a 和 NKp30b 的細(xì)胞在與靶細(xì)胞結(jié)合或共培養(yǎng)后釋放出大量的 IFN-γ，而轉(zhuǎn)染了NKp30c 的細(xì)胞僅能產(chǎn)生 IL-10 和少量的 IFN-γ。因此 NKp30a 和 NKp30b 代表免疫刺激亞型，能釋放 TH1 細(xì)胞因子，而 NKp30c 代表免疫抑制亞型，通過分泌 IL-10 來傳達(dá)免疫抑制信號；這種激活潛能的差異是由于與NKp30a 和NKp30b相比 ，NKp30c 在交叉連接后與 CD3ζ 的聯(lián)系減少了。同時有研究發(fā)現(xiàn)在胃腸道間質(zhì)瘤中，與表達(dá)其他幾種NKp30 亞型的患者相比，表達(dá) NKp30c 亞型患者的預(yù)后更差，這種差異可能是由 NKp30c 亞型介導(dǎo)的NK 細(xì)胞功能負(fù)面調(diào)節(jié)的后果【1】。

由于 NKp30 分子結(jié)構(gòu)與 CD28、細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原 4 ( Cytotoxic Tlymphocyte-associated antigen-4，CTLA-4) 、可誘導(dǎo)共刺激分子( Inducible costimulator，ICOS) 和程序性死亡受體 1( Programmed cell death protein 1，PD-1) 等 CD28 家族成員相似，因此 NKp30 被歸為 CD28 家族( 圖 1)【2】

NKp30 的相關(guān)配體

目前已發(fā)現(xiàn)的 NKp30 的配體有以下幾種：其中抑制性配體包括：（1）牛痘病毒屬的血凝素hemagglutinin HA；（2）人巨細(xì)胞病毒(HCMV)間層蛋白 pp65，pp65與NKp30 結(jié)合后導(dǎo)致NKp30與CD3ζ鏈分離，從而抑制 NKp30 介導(dǎo)的NK細(xì)胞活化；（3）其他未知配體，如MDSC 表面配體，通過NKp30 抑制NK細(xì)胞的功能。活化性配體包括：（1）腫瘤細(xì)胞質(zhì)膜表面的 B7-H6，特異性的表達(dá)在腫瘤細(xì)胞表面，目前尚未在健康細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)過 B7-H6；（2）腫瘤細(xì)胞配體：BCL2 相關(guān)永生基因 6（BAG6，也稱為 BAT3），表達(dá)在細(xì)胞核內(nèi)、質(zhì)膜表面以及外泌體中，NKp30 與未成熟樹突狀細(xì)胞（immature DCs） 細(xì)胞膜表面的BAG-6 結(jié)合后刺激NK細(xì)胞活化介導(dǎo)未成熟樹突狀細(xì)胞的死亡；（3）惡性瘧原蟲紅細(xì)胞膜蛋白 1 Pf EMPl；（4）細(xì)胞表面的肝素或硫酸肝素類蛋白聚糖，這些分子在腫瘤細(xì)胞中表達(dá)顯著上調(diào)【1、2】。

NKp30 抗腫瘤和病毒感染的作用

NKp30 抗腫瘤的作用

NKp30 在 NK 細(xì)胞抗腫瘤過程中發(fā)揮了重要的作用，目前已發(fā)現(xiàn)在多種腫瘤外周血或腹腔液中 NKp30 的表達(dá)下降，與此同時，NK 細(xì)胞的抗腫瘤活性隨之下降；NKp30的降低預(yù)示著NK細(xì)胞活性的下降，此外，NKp30不同亞型對患者預(yù)后的影響不同，其中表達(dá) NKp30a 和NKp30b 亞型的患者預(yù)后較好，而表達(dá)了 NKp30c 的患者預(yù)后較差，復(fù)發(fā)風(fēng)險增加。Nayeli 等通過比較30 例未經(jīng)過任何治療的乳腺癌患者，10 例乳腺良性病變及 24 例健康對照者外周血 NK 細(xì)胞表面活化性受體的表達(dá)，最終發(fā)現(xiàn)與健康對照者相比，乳腺癌患者和乳腺良性病變患者NKp30的表達(dá)顯著下降，表明乳腺癌患者 NK 細(xì)胞的細(xì)胞毒性下降可能是乳腺癌免疫逃逸的一種新機(jī)制。來自墨西哥的一項研究發(fā)現(xiàn)宮頸癌及癌前病變患者外周血中NKp30 顯著下降，并且NK細(xì)胞的抗腫瘤及抗病毒感染作用也顯著下降，可能與宮頸癌對NK細(xì)胞的免疫逃逸有關(guān)。Pesce 等通過分析一組選定的漿液性卵巢癌患者腹水中腫瘤相關(guān) NK 細(xì)胞的表型及功能，發(fā)現(xiàn)與自身外周血NK細(xì)胞相比，超過一半的病人腫瘤相關(guān) NK 細(xì)胞表面 NKp30 的表達(dá)顯著降低，并且這種下降與它的一個配體 B7-H6 有關(guān)，其存在于腫瘤細(xì)胞表面或細(xì)胞內(nèi)，也可以可溶性分子的形式存在于腹水中。研究發(fā)現(xiàn)，表達(dá)了低 NKp30 表型的 NK 細(xì)胞在消滅表達(dá) B7-H6 的靶細(xì)胞時，干擾素IFN -γ的釋放量減少且細(xì)胞毒性功能受到抑 制 。Semeraro 等通過觀察 3 組表達(dá)了不同 NKp30 亞型的高危神經(jīng)母細(xì)胞瘤獨(dú)立隊列患者的預(yù)后，發(fā)現(xiàn)免疫刺激亞型（NKp30a，NKp30b）與免疫抑制亞型（NKp30c）比值相同時，患者呈現(xiàn)出相似的預(yù)后；同時，誘導(dǎo)化療后緩解的高危神經(jīng)母細(xì)胞瘤患者外周血及骨髓中 NK 細(xì)胞若為 NKp30c 優(yōu)勢型，則患者復(fù)發(fā)的風(fēng)險會增加。同時，他們還證實(shí)了神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞表面的 B7-H6 配體可以從腫瘤細(xì)胞表面脫落，患者血清中可溶性 B7-H6 水平的升高，導(dǎo)致NK 細(xì)胞表面 NKp30 下調(diào)，進(jìn)而抑制了 NK 細(xì)胞的殺傷活性，并且可能與疾病的骨髓轉(zhuǎn)移和產(chǎn)生抗藥性相關(guān)。Fend 等證實(shí)了非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）患者 NKp30/NCR3 表達(dá)缺失，此外低表達(dá) NKp30 的患者無進(jìn)展生存期較短且遠(yuǎn)期預(yù)后較差，表明 NK 細(xì)胞可能參與了非小細(xì)胞肺癌的免疫逃逸機(jī)制，同時可通過檢測外周血中 NKp30 的表達(dá)量對患者進(jìn)行分層。此外，Castriconi研究發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)化生長因子 β1（TGFβ1） 可 從 基 因 轉(zhuǎn) 錄 水 平 抑 制 NKp30 以 及NKG2D 的表達(dá)，進(jìn)而抑制 NK 細(xì)胞的殺傷活性。研究發(fā)現(xiàn)，NK 細(xì)胞還可能參與了原發(fā)性肝癌的發(fā)病，在原發(fā)性肝癌患者中，NKG2D、NKp30、NKp46 等活化性受體的表達(dá)在早中期患者中含量較高，越晚期患者含量越低，而抑制性受體如 CD158b、CD159a則與之相反。

NKp30 抗病毒感染的作用

NKp30 不 僅 在NK 細(xì)胞抗腫瘤過程中發(fā)揮了不可或缺的作用，也參與了活化的 NK 細(xì)胞抗病毒感染的過程；研究表明HIV 感染會導(dǎo)致 NKp30 下調(diào)從而抑制 NK 細(xì)胞的免疫活性；而感染牛痘病毒則會導(dǎo)致 NKp30 的抑制性配體上調(diào)從而抑制 NK 細(xì)胞的免疫活性，另一方面在某些病毒感染時（如 HBV-ACLF）NKp30 的上調(diào)反而促進(jìn)了疾病的進(jìn)一步進(jìn)展。Zou 等證實(shí)乙型肝炎病毒相關(guān)急慢性肝功能衰竭（HBV-ACLF）患者肝臟 NK 細(xì)胞的聚集和外周血中自然細(xì)胞毒性受體（NKp30 和 NKp46）的上調(diào)與疾病進(jìn)展相關(guān)，并且HBV-ACLF 患者肝細(xì)胞上 B7-H6 以及 IL-32 的表達(dá)均顯著上調(diào)，他們進(jìn)一步通過體外細(xì)胞毒性實(shí)驗發(fā)現(xiàn) NKp30-B7-H6 相互作用通過上調(diào) HBV-ACLF患者肝臟 IL-32 的表達(dá)，進(jìn)而加重了肝細(xì)胞損傷，這些發(fā)現(xiàn)為自然細(xì)胞毒性受體和配體特異性識別在HBV -ACLF發(fā)病機(jī)制中的作用提供了新的見解。Mantovani 等證實(shí) HCV 感染時 NKp30各種亞型表達(dá)水平均下調(diào)，但 NKp30 a/c 比值顯著增加，與此同時 NKp30 a/b 比值和 NKp30 b/c 比值與正常對照組相比卻無明顯變化；此外，他們還觀察到 NKp30免疫刺激亞型和肝硬化正相關(guān)，而免疫抑制亞型NKp30c 和 FIB-4（計算肝纖維化程度的一種非侵入性方法）呈負(fù)相關(guān)，揭示了 NKp30 各種亞型在肝損傷及進(jìn)一步的肝纖維化中可能發(fā)揮了重要的作用。與之相反的是，Jarahian研究證實(shí)牛痘病毒感染細(xì)胞表面 NKp30 和 NKP46 受體的配體表達(dá)上調(diào)，但NKp44 和 NKG2D 配體的表達(dá)水平無明顯改變；痘病毒屬的牛痘病毒 VV 不僅可以用于人類牛痘疫苗的接種，還可用于溶瘤治療；通過選擇性的沉默細(xì)胞表面的 NCR，他們發(fā)現(xiàn)病毒感染細(xì)胞表面的 HA，亦可以重組可溶蛋白形式存在，能引起 NKp46介導(dǎo)的細(xì)胞活化，同時阻斷 NKp30 介導(dǎo)的細(xì)胞活化；由于 HA能阻斷NKp30的活化，牛痘病毒感染的細(xì)胞更容易逃脫NK細(xì)胞的殺傷，他們認(rèn)為痘病毒屬的HA是NCR 的一個保守性配體，在病毒感染晚期通過阻斷 NKp30 介導(dǎo)的細(xì)胞活化導(dǎo)致細(xì)胞的免疫逃逸，因此可以選用 HA 缺陷的牛痘病毒用于溶瘤治療。同時，De Maria 等證實(shí)感染 HIV 患者體內(nèi) NK細(xì)胞表面 NKp30和NKp46顯著下調(diào)，并且這種下調(diào)與 NCR 介導(dǎo)的 NK 細(xì)胞殺傷腫瘤細(xì)胞能力的下調(diào)呈平行關(guān)系，提示感染 HIV時NK 細(xì)胞表面NKp30 及其他 NCR 的下調(diào)可能是導(dǎo)致 NK 細(xì)胞殺傷功能下降的機(jī)制之一，這也解釋了一部分未接受治療的患者在發(fā)生嚴(yán)重的免疫抑制前，機(jī)會性腫瘤發(fā)生率較高的原因【1】。

NKp30與真菌感染

Li 等研究證實(shí) NKp30 在 NK 細(xì)胞識別和殺傷真菌生物如隱球菌和假絲酵母菌時發(fā)揮了關(guān)鍵的作用，NKp30 參與了 NK 細(xì)胞和真菌的結(jié)合、PI3K 信號通路的激活以及干擾素的釋放；已知 HIV感染導(dǎo)致的 AIDS 晚期真菌感染是大多數(shù)患者最終死亡的原因，De Maria 等已經(jīng)證實(shí) HIV 感染會導(dǎo)致NKp30 的下調(diào)，這可能是 AIDS 患者晚期易真菌感染的原因之一；更重要的是 Li 等發(fā)現(xiàn) IL-12 能恢復(fù)HIV 感染患者 NKp30 的表達(dá)以及 NK 細(xì)胞殺傷真菌的活性，因此可通過上調(diào) IL-12 糾正由于 NKp30 表達(dá)量減少導(dǎo)致的 HIV 感染患者 NK 細(xì)胞抗真菌活性缺陷。

NKp30與瘧疾

在關(guān)于 NK 細(xì)胞對瘧疾的固有免疫研究中發(fā)現(xiàn)，NKp30 可以直接與感染惡性瘧原蟲的紅細(xì)胞膜蛋白-1( Plasmodium falciparum erythrocyte membraneprotein-1，Pf EMP-1) 結(jié)合，導(dǎo)致 NK 細(xì)胞釋放穿孔素和顆粒酶 B，裂解寄生紅細(xì)胞( parasitized red bloodcells，pＲBCs) ，從而觸發(fā) NK 細(xì)胞對 pＲBCs 的殺傷作用。但之后有研究表明 NK 細(xì)胞通過直接接觸 來 識 別 和 殺 傷 pＲBCs，NKG2D、NCＲs、CD2、DNAM-1 和 2B4 等受體不參與其中【2】。

NKp30與子宮內(nèi)膜異位癥

徐紅等還發(fā)現(xiàn)盆腔子宮內(nèi)膜異位癥患者外周血及腹腔液中的 NKp30 表達(dá)水平均明顯下調(diào)且腹腔液中下調(diào)更明顯，由 NKp30 介導(dǎo)的 NK 細(xì)胞殺傷功能也隨之下降，提示盆腔局部免疫功能的改變可能是導(dǎo)致盆腔子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)病的原因【1】。

有報道研究了NKp30的參與NK細(xì)胞活化及免疫突觸形成，PI3K-Erk1/2信號通路參與NKp30分子介導(dǎo)的NK細(xì)胞活化【3】。

動物簡介

營養(yǎng)成分

生物學(xué)特性

遺傳信息

實(shí)驗儀器

測試流程

注意事項

1.具體的試驗周期以工程師告知的為準(zhǔn)。

2.文章中的圖片或者標(biāo)準(zhǔn)以及具體的試驗方案僅供參考，因為每個樣品和項目都有所不同，所以最終以工程師告知的為準(zhǔn)。

3.關(guān)于（樣品量）的需求，最好是先咨詢我們的工程師確定，避免不必要的樣品損失。

4.加急試驗周期一般是五個工作日左右，部分樣品有所差異

5.如果對于（B6-Tg(hNCR3)小鼠,動物試驗）還有什么疑問，可以咨詢我們的工程師為您一一解答。