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基本信息

品系名稱：B6-Trim25^tm1小鼠

英文名稱：B6-Trim25^tm1 mouse

疾病名稱：傳染性疾病、腫瘤

相關(guān)基因：Trim25

背景品系：C57BL/6J

遺傳類型：基因敲除

繁殖方式：HOM X HOM

繁殖代數(shù)：NA

研究用途：傳染性疾病、腫瘤等及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)方面的研究。

飼養(yǎng)環(huán)境：屏障或隔離環(huán)境

培育單位：北京華阜康生物科技股份有限公司、中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所

保種單位：中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所

資源鑒定：否

鑒定日期：暫無介紹

特征描述

E3 泛素連接酶三基序( tripartite motif，TRIM) 家族的成員超過 70 個(gè)，其成員的 N 末端均包含有 1 個(gè) RING結(jié)構(gòu)域、B 盒結(jié)構(gòu)域和卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域，此結(jié)構(gòu)有助于確定底物的可變 C-末端特異性。TRIM 家族蛋白質(zhì)在人體內(nèi)具有多種作用，包括調(diào)控天然免疫中的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、防御病毒感染、調(diào)控細(xì)胞增殖和癌細(xì)胞的遷移。

研究表明 TRIM25、TRIM28、TRIM56 和 TRIM71 都能結(jié)合RNA，形成一個(gè)RNA結(jié)合的E3泛素連 接酶池。E3 泛素連接酶能催化結(jié)合其泛素部分的靶蛋白，根據(jù)泛素鏈的類型，E3 泛素連接酶池可具有不同的功能。其中研究最多的聚泛素鏈?zhǔn)荎48 和K11，其形成的多聚蛋白鏈可以通過 26S 蛋白酶體來降解靶蛋白。同時(shí)也有研究表明其他聚泛素鏈如 K63 和單泛素，在信號(hào)傳導(dǎo)、蛋白定位和調(diào)節(jié)蛋白 － 蛋白質(zhì)相互作用中具有重要作用。而 TRIM25 可以催化更多的蛋白添加到K48 和 K63 連接的多聚蛋白鏈上，在天然免疫反應(yīng)中能夠靶向結(jié)合支架蛋白 14-3-3σ，從而起到降解病毒RNA的作用，同時(shí)還可作為針對(duì)病毒RNA 的下游效應(yīng)物影響信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。最近有研究表明 TRIM25 是一個(gè) RNA 依賴性輔因子，可以調(diào)節(jié) Lin28a/末端尿苷酰轉(zhuǎn)移酶( terminal uridylyl transferase，TUT) 4 基因介導(dǎo)的 let-7 前體尿苷化。

TRIM25 在子宮發(fā)育中的作用

在雌激素相關(guān)的細(xì)胞增殖和器官發(fā)育中 TRIM25不可或缺。TRIM25 首先由 Masami Muramatsu 團(tuán)隊(duì)從人基因組 DNA 與雌激素受體( estrogen receptor，ER) 結(jié)合的區(qū)域中鑒定出來，并認(rèn)為其是雌激素反應(yīng)性指蛋白，并且在ER 陽性乳腺細(xì)胞中的表達(dá)上調(diào)。該團(tuán)隊(duì)的另一項(xiàng)研究進(jìn)一步確定了小鼠雌激素反應(yīng)性指蛋白的同源物，并發(fā)現(xiàn)在 TRIM25 被破壞后小鼠仍能存活并且生長(zhǎng)肥碩，但子宮對(duì)雌激素的反應(yīng)性明顯降低，并且出現(xiàn)子宮不發(fā)育的情況。而 TRIM25 在雌激素應(yīng)答中發(fā)揮作用的可能機(jī)制是: 在雌激素存在的情況下TRIM25 使ERα 泛素化，通過促進(jìn) ERα 與轉(zhuǎn)錄共激活劑 Tip60 的相互作用以增加 ERα 的轉(zhuǎn)錄活性，同時(shí)定位并導(dǎo)致 ERα發(fā)生降解。TRIM25 也調(diào)節(jié)其他參與雌激素反應(yīng)的蛋白質(zhì)，例如 TRIM25 可以參與形成自動(dòng)調(diào)節(jié)反饋回路而調(diào)控抑癌基因 ATBF1 的表達(dá)水平。而作為一種共活化劑 ATBF1 與 ERα 競(jìng)爭(zhēng)性表達(dá)，并且可以負(fù)性調(diào)節(jié)雌激素介導(dǎo)的細(xì)胞增殖。TRIM25 在轉(zhuǎn)錄因子和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子 β 的 輔 因 子 KLF5 的降解過程中也具有類似的作用。

TRIM25 在腫瘤發(fā)生中的作用

TRIM25 與多種雌激素反應(yīng)相關(guān)的癌細(xì)胞增殖有關(guān)。其中，在乳腺癌 MCF7 細(xì)胞中可檢測(cè)到 TRIM25 mRNA，并且在增加雌激素的刺激后其啟動(dòng)子處的活性增加。此外，用反義RNA 敲低 MCF7 細(xì)胞的 TRIM25 表達(dá)后，將細(xì)胞植入雌性小鼠體內(nèi)，發(fā)現(xiàn)乳腺癌的生長(zhǎng)被抑制且抑制程度與TRIM25 表達(dá)量相關(guān);進(jìn)一步研究表明TRIM25 負(fù)責(zé)靶向結(jié)合陰性細(xì)胞周期調(diào)節(jié)劑 14-3-3σ，導(dǎo)致其降解，從而促進(jìn)細(xì)胞增殖。研究表明，有 70% 乳腺癌患者癌組織中 TRIM25 表達(dá)陽性，其中 50% 的患者之癌組織 TRIM25 表達(dá)量高于相鄰正常組織，而癌組織中 TRIM25 的表達(dá)水平與雌激素水平并不相關(guān)，說明TRIM25 可以逃逸雌激素介導(dǎo)的表達(dá)調(diào)控。同時(shí)，TRIM25 免疫反應(yīng)性與乳腺癌患者的預(yù)后不良具相關(guān)性。此外，在卵巢、胃和肺癌等腫瘤中 TRIM25 蛋白也呈過表達(dá)，但在子宮內(nèi)膜癌中表達(dá)下調(diào)。TRIM25 可通過多種方式促進(jìn)癌細(xì)胞增殖和遷移。有學(xué)者發(fā)現(xiàn) TRIM25 作用于 p53 /鼠雙微體 2 的環(huán)路。通過 RNA 干擾技術(shù)敲除肺癌細(xì)胞中的 TRIM25 能抑制肺癌細(xì)胞增殖、腫瘤發(fā)生和細(xì)胞遷移，而此時(shí) p53 表達(dá)水平增加。另有學(xué)者發(fā)現(xiàn) TRIM25 實(shí)際上通過抑制鼠雙微體 2 和 p300 的結(jié)合來增加 p53 和鼠雙微體 2 的水平，在這個(gè)過程中 p53 泛素化是必需的步驟; 同時(shí)也發(fā)現(xiàn)在 TRIM25 存在的情況下 p53 的活性、促凋亡和DNA 損傷修復(fù)的能力都降低，下調(diào) TRIM25 將導(dǎo)致 p53的乙?；黾?，從而增加細(xì)胞凋亡。TRIM25 也能通過轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子 β 途徑在胃癌細(xì)胞的遷移和侵襲中起作用，而對(duì)細(xì)胞增殖無影響; 敲低胃癌細(xì)胞中的 TRIM25表達(dá)能降低遷移相關(guān)蛋白( 如基質(zhì)金屬蛋白酶-2 和基質(zhì)金屬蛋白酶-9) 和黏附相關(guān)蛋白質(zhì)( 如 β-連環(huán)蛋白和纖連蛋白 1) 的水平，增加另一種黏附相關(guān)蛋白-E-鈣黏蛋白的水平; 當(dāng) TRIM25 敲低時(shí)，轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子 1 和骨形態(tài)發(fā)生蛋白-4 表達(dá)水平也降低，而當(dāng)細(xì)胞被轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子 1抑制劑干預(yù)時(shí) TRIM25 依賴性增加，細(xì)胞遷移和黏附活動(dòng)也會(huì)消失。以上這些研究表明 TRIM25 不僅具有穩(wěn)定蛋白質(zhì)的作用也有靶向降解蛋白質(zhì)的作用【1】。有報(bào)道指出TRIM25是一種新型的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)蛋白,并且可以負(fù)反饋調(diào)節(jié)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激。在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激時(shí),TRIM25通過調(diào)節(jié)Keap1/Nrf2信號(hào)通路間接調(diào)控ERAD反應(yīng):首先降低Keap1的蛋白穩(wěn)定性,然后促進(jìn)Nrf2入核,激活抗氧化通路,進(jìn)而抑制細(xì)胞ROS水平上調(diào)并促進(jìn)ERAD反應(yīng),ROS水平下調(diào)和ERAD反應(yīng)增強(qiáng)共同促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的存活。此外,動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明TRIM25敲低可以有效抑制體內(nèi)腫瘤的生長(zhǎng)。因此TRIM25是調(diào)控ERAD反應(yīng)的重要蛋白,有望成為臨床上腫瘤診斷及治療的新靶點(diǎn)【5】

TRIM25 在天然免疫中的作用

TRIM 家族的許多蛋白質(zhì)( 包括 TRIM25) 被發(fā)現(xiàn)在視黃酸誘導(dǎo)基因( retinoic acid-inducible gene，RIG) -1 介導(dǎo)的干擾素對(duì)病毒RNA的反應(yīng)中具有重要作用。RIG-1 是一種胞質(zhì)模式識(shí)別受體，它通過 5&39;-三磷酸識(shí)別病毒 RNA 分子。當(dāng)檢測(cè)到 5&39;-三磷酸-ＲNA 時(shí)，RIG-1通過線粒體抗病毒信號(hào)蛋白、蛋白激酶 TANK 結(jié)合激酶和 IκB 激酶啟動(dòng)下游信號(hào)通路，使轉(zhuǎn)錄因子干擾素調(diào)節(jié)因子 3 磷酸化從而介導(dǎo)二聚化，最終使Ⅰ型干擾素表達(dá)。TRIM25 能引起 RIG-1 的兩個(gè)胱天蛋白酶募集結(jié)構(gòu)域( caspase recruitment domain，CARD) 之一的 K63 連接泛素化，這是 RIG-1 有效募集其下游的線粒體抗病毒信號(hào)蛋白以及由此引起的引起有效干擾素反應(yīng)所必需的［22］。當(dāng) RIG-1 檢測(cè)到 5&39;-三磷酸-ＲNA 后即發(fā)生構(gòu)象變化，暴露第一 CARD，允許其與 TRIM25 相互作用，隨后泛素化第二 CARD。而不與 TRIM25 結(jié)合的突變體CARD 不被泛素化，RIG-1 也失去其對(duì)下游信號(hào)傳導(dǎo)的能力。RIG-1 也可以通過 CARD 依賴性結(jié)合短的且未錨定的多聚泛素鏈而被激活，而這些泛素鏈由 TRIM25 產(chǎn)生。研究表明 TRIM25 導(dǎo)致 RIG-1 的泛素化是抑制干擾素應(yīng)答的主要目標(biāo)，例如甲型流感病毒蛋白 NS1 可以通過阻斷 TRIM25 介導(dǎo)的 RIG-1 CARD 泛素化，而使病毒避免觸發(fā)干擾素反應(yīng)。不能阻斷泛素化的突變體 NS1 就不能阻止 RIG-1 信號(hào)傳導(dǎo)，并導(dǎo)致甲型流感蛋白的毒力喪失。這種抑制效果在不含 RNA 結(jié)合結(jié)構(gòu)域( RNA binding domain，ＲBD) 的 NS1 突變體中也明顯減弱。抑制 RIG-1 泛素化的另一種機(jī)制取決于線性泛素裝配復(fù)合物，其包含有 RING-IBR-RING 結(jié)構(gòu)域的E3 連接酶 HOIP 和 HOIL-1L。線性泛素裝配復(fù)合物可充當(dāng)負(fù)反饋調(diào)節(jié)劑，同時(shí)通過與 TRIM25 競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合及靶向結(jié)合 RIG-1 后，經(jīng)由蛋白酶體的降解以關(guān)閉 RIG-1【1】。

TRIM25在調(diào)控RNA代謝中的作用

在早期研究中，已鑒定出約 400 種哺乳動(dòng)物中的RNA 結(jié)合蛋白( RNA-binding protein，RBP)。最近，隨著高通量檢測(cè)方法如互動(dòng)體 RNA 蛋白捕獲技術(shù)的發(fā)展，識(shí)別的RBP 數(shù)可達(dá)數(shù)百個(gè)，其中許多均沒有經(jīng)典的RBD。其中在 HeLa 細(xì)胞中鑒定出 860 個(gè) RBP，其中一半沒有規(guī)范的RBD，且有31 個(gè)新型RBP能否結(jié)合RNA 以及與RNA 已知功能的關(guān)系均未能確定。TRIM25 是在 HeLa 細(xì)胞、HEK293 細(xì)胞和小鼠胚胎干細(xì)胞中鑒定出的新型 RBP 之一。此外，其他 TRIM家族成員也被認(rèn)為能與 RNA 結(jié) 合，包 括 TRIM28、TRIM56 和 TRIM71。目前，已經(jīng)發(fā)現(xiàn) TRIM25 和TRIM71 能通過不同的 RBD 結(jié)合 RNA，其中 TRIM71 是通過由 Ncl-1、HT2A 和 Lin-4 三重結(jié)構(gòu)域組成的 NHL 重復(fù)序列進(jìn)行結(jié)合，而 TRIM25 則是利用其包含卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域的中間部分。這兩種蛋白在小鼠 ES 細(xì)胞中大量表達(dá)，并且其表達(dá)模式遵循干細(xì)胞特異性因子 Lin28 和Oct4 分化減量化的表達(dá)模式。TRIM25 蛋白的突變會(huì)導(dǎo)致發(fā)育時(shí)序的缺陷，并加速體細(xì)胞和生殖細(xì)胞的分化。當(dāng) TRIM25 被發(fā)現(xiàn)是調(diào)節(jié) Lin28a /TUT4 介 導(dǎo) let-7a-1 前體尿苷化的輔因子時(shí)，其重要性更為凸顯。TRIM25 的泛素化和蛋白穩(wěn)定性是 Lin28a /TUT4 介導(dǎo)的尿苷化所必需的，其可能通過橋接 Lin28 和 TUT4 或輔助 RNP 復(fù)合物的形成而發(fā)揮作用，也有可能通過泛素化負(fù)調(diào)節(jié)和阻斷蛋白質(zhì)的尿苷化，并通過蛋白酶體將其靶向降解。Lin28a 是在許多物種中具有表達(dá)的一種保守蛋白，最初被發(fā)現(xiàn)于秀麗隱桿線蟲，其在后生動(dòng)物胚胎發(fā)育的早期階段表達(dá)豐富，并可抑制微小 RNA let-7 家族的表達(dá)。而隨著胚胎發(fā)育Lin28a 表達(dá)逐漸受限，在分化程度更高的細(xì)胞中其抑制let-7 家族的作用也逐步減輕。Lin28a 對(duì) let-7 的抑制作用是基于其與 let-7 前體的保守末端環(huán)的相互作用，這為 TUT4 和來自 TUT 家族的其他成員提供了一個(gè)將多聚尿苷酸尾部添加到 let-7 前體中以進(jìn)行催化反應(yīng)的平臺(tái)，而聚尿苷化最終導(dǎo)致 let-7 前體的不穩(wěn)定和成熟 let-7 減少。TRIM25 可與 let-7a-1 結(jié)合，使得后者在 Lin28 存在時(shí)可更有效地尿苷化。這表明TRIM25 的 ＲNA 結(jié)合能力對(duì) let-7 前體的加工和穩(wěn)定性具有重要作用，但需要進(jìn)一步研究以確定這種效應(yīng)的發(fā)生機(jī)制以及是否需要 TRIM25 的泛素化活性。為了進(jìn)一步了解 TRIM25 作為 RBP 的作用，需要識(shí)別 TRIM25 結(jié)合的 RNA 以及與其相互作用的 RNA 蛋白復(fù)合物，特別是通過病毒 RNA 激活 RIG-1 的機(jī)制。我們假設(shè) TRIM25 與 RNA 的結(jié)合可導(dǎo)致相鄰 RBP 的泛素化，當(dāng)具有多種剪切體的 ＲBP 結(jié)合于 ＲNA 蛋白復(fù)合物附近的 RNA 時(shí)，TRIM25 會(huì)修飾 RNA 蛋白復(fù)合物從而以微調(diào)的方式改變其分子功能; 另外在 RIG-I 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的作用下，RNA 可以使 TＲIM25 更接近 RIG-1，使其能夠泛素化 RIG-1 并激活下游信號(hào)傳導(dǎo)途徑; 或者 TRIM25與 RNA 結(jié)合可能阻礙其與 RIG-1 的隔離而激活 RIG-1信號(hào)傳導(dǎo)的能力。因此，驗(yàn)證 TRIM25 的 RNA 結(jié)合能力在其調(diào)節(jié)細(xì)胞周期或雌激素應(yīng)答 中的重要性也很有意義【1】。

有文獻(xiàn)報(bào)道了TRIM25在抗病毒天然免疫中的作用及惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用。補(bǔ)充了上述文獻(xiàn)不足【2】。

TRIM25與惡性腫瘤TRIM25 作為先天免疫的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子，參與NF-κB 與 IFN 等天然免疫信號(hào)的調(diào)節(jié)。NF-κB 廣泛存在于細(xì)胞中，除了作為炎癥調(diào)節(jié)因子外，與腫瘤細(xì)胞分化、增殖、凋亡、免疫應(yīng)答等應(yīng)激反應(yīng)息息相關(guān)。Ⅰ型 IFN 在腫瘤細(xì)胞的免疫監(jiān)控、抑制細(xì)胞增殖和免疫調(diào)控等方面也有著重要的作用。近年來已發(fā)現(xiàn) TRIM25 在肺癌、前列腺癌、肝癌等惡性腫瘤中發(fā)揮重要作用【2】。

動(dòng)物簡(jiǎn)介

營(yíng)養(yǎng)成分

生物學(xué)特性

實(shí)驗(yàn)儀器

測(cè)試流程

注意事項(xiàng)

1.具體的試驗(yàn)周期以工程師告知的為準(zhǔn)。

2.文章中的圖片或者標(biāo)準(zhǔn)以及具體的試驗(yàn)方案僅供參考，因?yàn)槊總€(gè)樣品和項(xiàng)目都有所不同，所以最終以工程師告知的為準(zhǔn)。

3.關(guān)于（樣品量）的需求，最好是先咨詢我們的工程師確定，避免不必要的樣品損失。

4.加急試驗(yàn)周期一般是五個(gè)工作日左右，部分樣品有所差異

5.如果對(duì)于（B6-Trim25tm1小鼠,動(dòng)物試驗(yàn)）還有什么疑問，可以咨詢我們的工程師為您一一解答。