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注意：因業(yè)務(wù)調(diào)整，暫不接受個(gè)人委托測(cè)試望見(jiàn)諒。

品系介紹

品系全名：B6;129S-Rag1^{tm1(loxP-EGFP-PolyA-loxP-Neo-loxP)Smoc}

目錄號(hào)：NM-KI-00069

品系狀態(tài)：活體

重組激活基因(recombination．a(chǎn)ctivating genes，Rags)在V(D)J重組過(guò)程中發(fā)揮重要作用，V(D)J重組過(guò)程中發(fā)生的免疫球蛋白(Ig)基因和T細(xì)胞受體(TCR)基因的重排和重組是B細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞成熟過(guò)程中的必需階段。 小鼠的兩個(gè)重組激活基因Rag1和Rag2均位于2號(hào)染色體，其編碼的Rag1和Rag2蛋白在成熟前T細(xì)胞發(fā)育成為成熟T細(xì)胞以及成熟前B細(xì)胞發(fā)育成為成熟B細(xì)胞的過(guò)程中，通過(guò)識(shí)別Ig或TCR基因，并結(jié)合基因片段中的重組信號(hào)序列(RSS)，啟動(dòng)V(D)J重組。 Rag1和Rag2在淋巴細(xì)胞V(D)J重排過(guò)程中缺一不可，任意一個(gè)缺失都會(huì)導(dǎo)致T、B淋巴細(xì)胞發(fā)育中斷，表現(xiàn)為嚴(yán)重的T／B細(xì)胞早期發(fā)育阻滯，T細(xì)胞停滯在CD3-CD4-CD8+CD25+階段，B細(xì)胞停滯在B220-CD43+IgM-階段，進(jìn)而不能產(chǎn)生成熟的T、B淋巴細(xì)胞。因外周血中沒(méi)有成熟T/B淋巴細(xì)胞，導(dǎo)致機(jī)體產(chǎn)生與人“重癥聯(lián)合免疫缺陷癥”(severe combined immunodeficiency，SCID)類似的癥狀。 Rag1或者Rag2基因缺陷的小鼠外觀發(fā)育正常，具有正常生殖能力，但由于不能產(chǎn)生T、B淋巴細(xì)胞，無(wú)法對(duì)異體來(lái)源的細(xì)胞產(chǎn)生異體排斥，因而可以作為移植瘤模型的載體。 在Rag1基因ATG位點(diǎn)定點(diǎn)敲入loxP-EGFP-PolyA-loxP-Neo-loxP表達(dá)框，從而造成Rag1基因沉默。作為Rag1基因敲除小鼠，皮下接種肝癌組織塊和腫瘤細(xì)胞后能形成腫瘤，并且可以增長(zhǎng)。由FACS檢測(cè)小鼠外周靜脈血中的T、B淋巴細(xì)胞生成量極低，與Nude小鼠T、B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生量相當(dāng)甚至更低，與野生型小鼠相比具有顯著性差異。腫瘤組織HE染色病理切片結(jié)果顯示Rag1 KO小鼠和Nude小鼠腫瘤切片較為相似。該品系小鼠具有替代Nude，NOD-SCID小鼠作為腫瘤成瘤模型的潛力。

基本信息

基因名：Rag1

基因曾用名：Rag-1

NCBI ID：19373

MGI ID：97848

Ensembl ID：ENSMUSG00000061311

Pubmed：Rag1

人類同源基因：RAG1

相關(guān)數(shù)據(jù)

圖1 Rag1構(gòu)建策略圖。

Rag1、Rag2基因敲除小鼠表達(dá)驗(yàn)證

圖2 4種小鼠外周血功能T、B淋巴細(xì)胞含量流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果。

通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)對(duì)野生型C57BL/6J小鼠、NOD-SCID小鼠、Rag1-/-小鼠和Rag2-/-小鼠外周血中B細(xì)胞和T細(xì)胞的檢測(cè)結(jié)果表明：Rag1-/-小鼠和Rag2-/-小鼠中的T細(xì)胞和B細(xì)胞含量較野生型小鼠有顯著性降低（P<0.0001,圖1A），T細(xì)胞和B細(xì)胞含量分別約為野生型的5％和25％；較NOD-SCID小鼠雖然均值略有增高，但無(wú)顯著性差異(P>0.05，圖1B)。

圖3. Rag1-KO和Rag2-KO小鼠外周血中T 、B細(xì)胞缺失。

取Rag1-KO和Rag2-KO小鼠小鼠的外周血，通過(guò)FACS對(duì)其中T 、B和NK細(xì)胞的組成進(jìn)行分析（A）并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)對(duì)比（B）。

圖4. Rag1-KO和Rag2-KO小鼠脾臟中T 、B細(xì)胞缺失。

取Rag1-KO和Rag2-KO小鼠小鼠的脾臟細(xì)胞，通過(guò)FACS對(duì)其中T 、B和NK細(xì)胞的組成進(jìn)行分析（A）并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)對(duì)比（B）。

圖5. Rag1-KO和Rag2-KO小鼠胸腺中T 、B細(xì)胞缺失。

取Rag1-KO和Rag2-KO小鼠小鼠的胸腺細(xì)胞，通過(guò)FACS對(duì)其中T 、B和NK細(xì)胞的組成進(jìn)行分析（A）并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)對(duì)比（B）。

圖6. Rag2敲除小鼠胸腺和脾臟中EGFP檢測(cè)。

結(jié)果顯示Rag2 KO小鼠胸腺和脾臟中有EGFP陽(yáng)性的細(xì)胞，并且EGFP陽(yáng)性細(xì)胞均為CD4陰性和CD8陰性細(xì)胞。

Rag1、Rag2基因敲除小鼠的成瘤實(shí)驗(yàn)

圖7 不同背景小鼠接種A549腫瘤細(xì)胞成瘤性結(jié)果

將異源腫瘤細(xì)胞分別移植到Rag1-/-小鼠、Rag2-/-小鼠、NOD-SCID小鼠、BALB/c裸小鼠和野生型C57BL/6J小鼠上，觀察和比較腫瘤細(xì)胞移植后的生長(zhǎng)。

結(jié)果顯示，在Rag1-/-和Rag2-/-背景小鼠上，移植腫瘤生長(zhǎng)速度最快，且兩者之間無(wú)顯著性差異；在NOD-SCID背景小鼠上的腫瘤生長(zhǎng)速度次之；然后是在BALB/c裸小鼠背景；而在C57BL/6J小鼠上則無(wú)腫瘤生成(圖2A)。Rag1-/-和Rag2-/-小鼠上的腫瘤，自腫瘤移植22 d后，顯著大于BALB/c裸小鼠和NOD-SCID小鼠上的腫瘤體積(圖2A)。

腫瘤組織切片的HE染色結(jié)果顯示，來(lái)自Rag1-/-和Rag2-/-小鼠上的移植腫瘤組織和其他品系小鼠上的移植腫瘤組織切片沒(méi)有顯著差異，各組小鼠腫瘤細(xì)胞均生長(zhǎng)旺盛，腫瘤細(xì)胞大小不一，胞核形態(tài)比較類似，可見(jiàn)瘤組織均呈巢狀或片狀生長(zhǎng)，細(xì)胞間微血管較豐富(圖2B)。

Rag1-/-和Rag2-/-小鼠相較于傳統(tǒng)的異源腫瘤移植受體小鼠品系BALB/cNu裸小鼠和NOD-SCID小鼠，腫瘤生長(zhǎng)速度更快。

相關(guān)品系

Prag1-Flox品系名：C57BL/6JSmoc-Prag1^{em1(flox)Smoc}品系狀態(tài)：在研 | 目錄號(hào)：待定

Rag1-2A-Cre品系名：C57BL/6JSmoc-Rag1^{em(2A-Cre)Smoc}品系狀態(tài)：在研 | 目錄號(hào)：NM-KI-220088

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實(shí)驗(yàn)儀器

測(cè)試流程

注意事項(xiàng)

1.具體的試驗(yàn)周期以工程師告知的為準(zhǔn)。

2.文章中的圖片或者標(biāo)準(zhǔn)以及具體的試驗(yàn)方案僅供參考，因?yàn)槊總€(gè)樣品和項(xiàng)目都有所不同，所以最終以工程師告知的為準(zhǔn)。

3.關(guān)于（樣品量）的需求，最好是先咨詢我們的工程師確定，避免不必要的樣品損失。

4.加急試驗(yàn)周期一般是五個(gè)工作日左右，部分樣品有所差異

5.如果對(duì)于（Rag1| Rag1-KO免疫缺陷小鼠）還有什么疑問(wèn)，可以咨詢我們的工程師為您一一解答。