獲取試驗(yàn)方案？獲取試驗(yàn)報價？獲取試驗(yàn)周期？

注意：因業(yè)務(wù)調(diào)整，暫不接受個人委托測試望見諒。

基本信息

品系名稱：全身性表達(dá)紅色熒光轉(zhuǎn)基因小鼠

英文名稱：C57BL/6J-TgN(CAG-DsRed-1)-ZLFILAS

疾病名稱：暫無介紹

相關(guān)基因：DsRed

背景品系：C57BL/6J

遺傳類型：轉(zhuǎn)基因

繁殖方式：同背景品系

繁殖代數(shù)：NA

研究用途：紅色熒光工具小鼠。

飼養(yǎng)環(huán)境：屏障或隔離環(huán)境

培育單位：中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動物研究所

保種單位：中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動物研究所

資源鑒定：否

鑒定日期：暫無介紹

特征描述

建立一種長期、穩(wěn)定、直觀且不影響組織細(xì)胞形成能力的標(biāo)記方法是進(jìn)行干細(xì)胞分化與定位研究的有效工具。常用的干細(xì)胞標(biāo)記方法有LacZ基因、熒光染料Hochest和5-溴-2脫氧尿嘧啶核苷（BrdU）等，這些免疫組化染色的缺陷是只能在組織切片上觀察干細(xì)胞的存活、遷移和分化情況，需要犧牲大量的實(shí)驗(yàn)動物來觀察不同時間點(diǎn)干細(xì)胞在體內(nèi)的轉(zhuǎn)歸，無法實(shí)時、縱向監(jiān)測干細(xì)胞在體內(nèi)的動態(tài)遷移過程（Cao et al., 2004）。熒光發(fā)光是通過激發(fā)光激發(fā)熒光基團(tuán)達(dá)到高能量狀態(tài)，而后產(chǎn)生發(fā)射光。常用的有紅色熒光蛋白（RFP）和綠色熒光蛋白(GFP)。熒光成像被廣泛用于細(xì)胞凋亡、蛋白質(zhì)相互作用、免疫細(xì)胞遷移、癌癥及藥物研究等多個領(lǐng)域。最近幾年，這項(xiàng)技術(shù)開始被用于干細(xì)胞研究，可在活體內(nèi)觀察干細(xì)胞的行為和生物學(xué)特性及其轉(zhuǎn)歸，準(zhǔn)確獲得活體動物體內(nèi)靶位置的干細(xì)胞在各時間點(diǎn)的生長和分化情況，加速了干細(xì)胞在腫瘤、組織工程等領(lǐng)域的研究進(jìn)展。

為滿足科學(xué)研究的需要，國內(nèi)外研究者建立了多種熒光轉(zhuǎn)基因小鼠。但由于轉(zhuǎn)基因載體構(gòu)建所采用的啟動子不同、靶基因染色體插入位置的位置效應(yīng)以及轉(zhuǎn)基因拷貝數(shù)的差異，不同熒光轉(zhuǎn)基因小鼠的造血干細(xì)胞標(biāo)記率和標(biāo)記細(xì)胞亞群不同，從而影響了小鼠干細(xì)胞熒光標(biāo)記在干細(xì)胞研究中的進(jìn)一步應(yīng)用。

（1）活體熒光影像系統(tǒng)分析紅色和綠色熒光蛋白轉(zhuǎn)基因小鼠

對各品系的熒光蛋白轉(zhuǎn)基因小鼠進(jìn)行活體熒光影像系統(tǒng)分析，結(jié)果顯示，C57BL/6J-TgN（CAG-DsRed-1和CAG-DsRed-2）ZLFILAS轉(zhuǎn)基因小鼠呈現(xiàn)紅色熒光，熒光蛋白在全身多個組織器官中表達(dá)(圖1A和1B)。C57BL/6J-TgN（CAG-EGFP-1、CAG-EGFP-2和CAG-EGFP-3）ZLFILAS轉(zhuǎn)基因小鼠呈現(xiàn)綠色熒光，熒光蛋白在全身多個組織器官中表達(dá)。其中C57BL/6J-TgN（CAG-EGFP-1）ZLFILAS轉(zhuǎn)基因小鼠的熒光蛋白表達(dá)強(qiáng)度最高，其次是C57BL/6J-TgN（CAG-EGFP-2）ZLFILAS轉(zhuǎn)基因小鼠，C57BL/6J-TgN（CAG-EGFP-3）ZLFILAS轉(zhuǎn)基因小鼠的熒光蛋白表達(dá)相對最弱(圖1C、1D和1E)。

（2）LSK造血干細(xì)胞中熒光標(biāo)記細(xì)胞的比率

流式細(xì)胞檢測表明，各熒光轉(zhuǎn)基因小鼠品系的LSK造血干細(xì)胞均有熒光標(biāo)記細(xì)胞（圖2）。其中，C57BL/6J-TgN（CAG-DsRed-1和CAG-EGFP-1）ZLFILAS這兩個熒光轉(zhuǎn)基因品系的幾乎全部LSK造血干細(xì)胞為熒光標(biāo)記細(xì)胞，熒光細(xì)胞比率分別為99.9%和99.4%；C57BL/6J-TgN(CAG-EGFP-2和CAG-EGFP-2)ZLFILAS的LSK造血干細(xì)胞中的熒光標(biāo)記細(xì)胞比率較低，分別為85.3%和65.7%；而C57BL/6J-TgN（CAG-DsRed-2）ZLFILAS的LSK造血干細(xì)胞中的熒光標(biāo)記細(xì)胞比率則只有0.1%。該結(jié)果表明，LSK造血干細(xì)胞中的熒光標(biāo)記細(xì)胞比率與活體熒光成像結(jié)果并非完全一對應(yīng)。

（3）骨髓細(xì)胞中的熒光標(biāo)記細(xì)胞

熒光顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)，不同品系骨髓細(xì)胞中的熒光標(biāo)記細(xì)胞比率不同，其中，C57BL/6J-TgN（CAG-DsRed-1和CAG-EGFP-1）ZLFILAS這兩個熒光轉(zhuǎn)基因品系的熒光標(biāo)記細(xì)胞比率最高。

熒光蛋白在體內(nèi)，尤其是干細(xì)胞中的表達(dá)必須在強(qiáng)啟動子，如雞β肌動蛋白（chicken β-actin）或CAG啟動子的驅(qū)動下才能高效的進(jìn)行（Sangmiet sl., 2002），且轉(zhuǎn)基因載體插入位點(diǎn)和拷貝數(shù)對基因表達(dá)效率也具有顯著的影響。本研究將DsRed和EGFP插入CAG強(qiáng)啟動子下游，構(gòu)建了系統(tǒng)性表達(dá)紅色和綠色熒光轉(zhuǎn)基因小鼠。其中DsRed-Express轉(zhuǎn)基因小鼠紅色熒光蛋白EGFP轉(zhuǎn)基因小鼠綠色熒光蛋白在全身多個組織器官和骨髓細(xì)胞中表達(dá)。其中，C57BL/6J-TgN（CAG-DsRed-1）ZLFILAS和C57BL/6J-TgN（CAG-EGFP-1）ZLFILAS的造血干細(xì)胞全部為熒光標(biāo)記細(xì)胞，這兩種紅色和綠色熒光轉(zhuǎn)基因小鼠模型將為干細(xì)胞的分化與定位研究提供了有力的工具動物和分子影像學(xué)技術(shù)手段。

實(shí)驗(yàn)儀器

測試流程

注意事項(xiàng)

1.具體的試驗(yàn)周期以工程師告知的為準(zhǔn)。

2.文章中的圖片或者標(biāo)準(zhǔn)以及具體的試驗(yàn)方案僅供參考，因?yàn)槊總€樣品和項(xiàng)目都有所不同，所以最終以工程師告知的為準(zhǔn)。

3.關(guān)于（樣品量）的需求，最好是先咨詢我們的工程師確定，避免不必要的樣品損失。

4.加急試驗(yàn)周期一般是五個工作日左右，部分樣品有所差異

5.如果對于（全身性表達(dá)紅色熒光轉(zhuǎn)基因小鼠）還有什么疑問，可以咨詢我們的工程師為您一一解答。