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核酸檢測(cè)正常確診檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)

原創(chuàng)發(fā)布者:北檢院    發(fā)布時(shí)間:2025-04-27     點(diǎn)擊數(shù):

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核酸檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)流程及技術(shù)要點(diǎn)解析

核酸檢測(cè)作為病原體診斷的核心手段,在新冠肺炎等傳染性疾病防控中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。本文依據(jù)國(guó)家衛(wèi)健委發(fā)布的技術(shù)規(guī)范,系統(tǒng)介紹核酸檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)化流程及核心要素。

一、檢測(cè)樣品類型

臨床檢測(cè)主要采集上呼吸道樣本,包括鼻咽拭子、口咽拭子兩種形式。對(duì)于重癥患者或特殊病例,可補(bǔ)充收集深咳痰液、支氣管肺泡灌洗液等下呼吸道樣本。所有樣本需使用專用病毒保存管進(jìn)行運(yùn)輸,在2-8℃環(huán)境下4小時(shí)內(nèi)送檢,超時(shí)需-70℃低溫保存。

二、核心檢測(cè)項(xiàng)目

核酸檢測(cè)聚焦于新冠病毒特異性基因序列的識(shí)別,主要檢測(cè)靶標(biāo)為ORF1ab基因N基因雙靶點(diǎn)。實(shí)驗(yàn)室需同時(shí)設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照(質(zhì)控品)和陰性對(duì)照(空白試劑),確保檢測(cè)系統(tǒng)的有效性。

三、標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法

采用實(shí)時(shí)熒光RT-PCR法進(jìn)行檢測(cè),具體流程分為三個(gè)關(guān)鍵階段:

  1. 病毒滅活處理:使用含胍鹽的滅活型保存液對(duì)樣本進(jìn)行預(yù)處理,消除感染風(fēng)險(xiǎn)。
  2. 核酸提取純化:通過(guò)磁珠法提取病毒RNA,去除樣本中的抑制物和雜質(zhì)。
  3. 擴(kuò)增檢測(cè)分析:在PCR擴(kuò)增體系中加入特異性引物和探針,通過(guò)熒光信號(hào)累積判定結(jié)果。

四、主要檢測(cè)設(shè)備

檢測(cè)過(guò)程涉及三類核心儀器:

  • 核酸提取設(shè)備:圣湘生物AutoPure 96全自動(dòng)核酸提取儀、達(dá)安基因DA8600提取工作站
  • 擴(kuò)增檢測(cè)系統(tǒng):ABI 7500實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀、羅氏LightCycler 480系統(tǒng)
  • 輔助設(shè)備:生物安全柜(BSC-1300ⅡA2型)、高速離心機(jī)(轉(zhuǎn)速≥12000rpm)

五、結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)

檢測(cè)系統(tǒng)設(shè)置Ct值閾值≤40作為陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)。ORF1ab和N基因雙靶標(biāo)陽(yáng)性可確診感染;單靶標(biāo)陽(yáng)性需重新采樣復(fù)檢。需特別注意,當(dāng)Ct值處于37-40區(qū)間時(shí),需結(jié)合臨床指征進(jìn)行綜合判斷。

技術(shù)發(fā)展動(dòng)態(tài):新型數(shù)字PCR技術(shù)已開(kāi)始應(yīng)用于疑難樣本檢測(cè),其靈敏度較傳統(tǒng)PCR提高10-100倍,可有效解決"假陰性"問(wèn)題。第三代測(cè)序技術(shù)(納米孔測(cè)序)在病毒變異監(jiān)測(cè)中展現(xiàn)出獨(dú)特優(yōu)勢(shì)。

當(dāng)前核酸檢測(cè)已形成完整的質(zhì)控體系,涵蓋從采樣運(yùn)輸?shù)綄?shí)驗(yàn)操作的全程監(jiān)控。醫(yī)療機(jī)構(gòu)需定期參加室間質(zhì)評(píng),確保檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性,為疫情防控提供科學(xué)支撐。


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實(shí)驗(yàn)儀器

實(shí)驗(yàn)室儀器 實(shí)驗(yàn)室儀器 實(shí)驗(yàn)室儀器 實(shí)驗(yàn)室儀器

測(cè)試流程

核酸檢測(cè)正常確診檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)流程

注意事項(xiàng)

1.具體的試驗(yàn)周期以工程師告知的為準(zhǔn)。

2.文章中的圖片或者標(biāo)準(zhǔn)以及具體的試驗(yàn)方案僅供參考,因?yàn)槊總€(gè)樣品和項(xiàng)目都有所不同,所以最終以工程師告知的為準(zhǔn)。

3.關(guān)于(樣品量)的需求,最好是先咨詢我們的工程師確定,避免不必要的樣品損失。

4.加急試驗(yàn)周期一般是五個(gè)工作日左右,部分樣品有所差異

5.如果對(duì)于(核酸檢測(cè)正常確診檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn))還有什么疑問(wèn),可以咨詢我們的工程師為您一一解答。

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