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天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶測定試劑盒(天門冬氨酸底物法)檢測

原創(chuàng)發(fā)布者:北檢院    發(fā)布時間:2025-04-10     點(diǎn)擊數(shù):

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天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)活性測定實(shí)驗(yàn)報(bào)告

一、檢測樣品

本實(shí)驗(yàn)檢測的樣品為臨床采集的人體血清樣本。所有樣本均按照標(biāo)準(zhǔn)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)流程進(jìn)行采集、分離和保存,確保樣本無溶血、脂血或污染,符合AST活性測定的預(yù)處理要求。

二、檢測項(xiàng)目

檢測項(xiàng)目為血清中天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST,EC 2.6.1.1)的活性水平,結(jié)果以單位每升(U/L)表示。AST是肝功能及心肌損傷的重要生化標(biāo)志物,其活性升高常見于肝炎、心肌梗死等疾病。

三、檢測方法

采用天門冬氨酸底物法(IFCC推薦方法),其原理為: 在AST催化下,底物L(fēng)-天門冬氨酸與α-酮戊二酸發(fā)生轉(zhuǎn)氨基反應(yīng),生成草酰乙酸和L-谷氨酸。草酰乙酸在蘋果酸脫氫酶(MDH)作用下進(jìn)一步還原為蘋果酸,同時伴隨還原型輔酶Ⅰ(NADH)的氧化反應(yīng)。通過監(jiān)測340 nm波長處NADH吸光度的下降速率,可計(jì)算AST活性。

操作步驟

  1. 試劑配制:按試劑盒說明將R1(含α-酮戊二酸、NADH及MDH)與R2(含L-天門冬氨酸)預(yù)溫至37℃。
  2. 樣本加載:取3 μL血清樣本與180 μL R1試劑混合,37℃孵育5分鐘。
  3. 反應(yīng)啟動:加入60 μL R2試劑,立即于全自動生化分析儀中連續(xù)監(jiān)測340 nm吸光度變化,持續(xù)3分鐘。
  4. 結(jié)果計(jì)算:根據(jù)ΔA/min(吸光度變化率)結(jié)合反應(yīng)體系體積和樣本稀釋倍數(shù),按公式計(jì)算AST活性值。

四、檢測儀器

實(shí)驗(yàn)使用全自動生化分析儀完成,具體儀器參數(shù)如下:

  • 儀器型號:日立7180型全自動生化分析儀
  • 波長設(shè)置:主波長340 nm,副波長405 nm(雙波長法消除干擾)
  • 溫控系統(tǒng):37℃恒溫反應(yīng)槽
  • 檢測模式:速率法(兩點(diǎn)動力學(xué)檢測)

五、注意事項(xiàng)

  1. 樣本需在采集后2小時內(nèi)分離血清,避免紅細(xì)胞內(nèi)AST釋放干擾結(jié)果。
  2. 試劑開封后需避光保存,防止NADH光解導(dǎo)致吸光度基線漂移。
  3. 若樣本AST活性超過2000 U/L,需用生理鹽水稀釋后重新檢測。

結(jié)論 本實(shí)驗(yàn)通過標(biāo)準(zhǔn)化的底物法及高精度儀器,可準(zhǔn)確、高效地測定血清AST活性,為臨床診斷肝臟及心肌疾病提供可靠依據(jù)。

實(shí)驗(yàn)儀器

實(shí)驗(yàn)室儀器 實(shí)驗(yàn)室儀器 實(shí)驗(yàn)室儀器 實(shí)驗(yàn)室儀器

測試流程

天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶測定試劑盒(天門冬氨酸底物法)檢測流程

注意事項(xiàng)

1.具體的試驗(yàn)周期以工程師告知的為準(zhǔn)。

2.文章中的圖片或者標(biāo)準(zhǔn)以及具體的試驗(yàn)方案僅供參考,因?yàn)槊總€樣品和項(xiàng)目都有所不同,所以最終以工程師告知的為準(zhǔn)。

3.關(guān)于(樣品量)的需求,最好是先咨詢我們的工程師確定,避免不必要的樣品損失。

4.加急試驗(yàn)周期一般是五個工作日左右,部分樣品有所差異

5.如果對于(天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶測定試劑盒(天門冬氨酸底物法)檢測)還有什么疑問,可以咨詢我們的工程師為您一一解答。

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