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注意：因業(yè)務(wù)調(diào)整，暫不接受個(gè)人委托測(cè)試望見(jiàn)諒。

內(nèi)皮細(xì)胞流式檢測(cè)實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果分析

檢測(cè)樣品

本實(shí)驗(yàn)檢測(cè)樣品為人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVECs），所有細(xì)胞均來(lái)源于健康供體，經(jīng)無(wú)菌分離和體外培養(yǎng)擴(kuò)增后獲得。細(xì)胞培養(yǎng)條件為37℃、5% CO?的恒溫恒濕環(huán)境，使用含10%胎牛血清（FBS）的Endothelial Cell Growth Medium（EGM-2）培養(yǎng)基。實(shí)驗(yàn)前通過(guò)顯微鏡觀察確認(rèn)細(xì)胞形態(tài)及融合度達(dá)80%以上。

檢測(cè)項(xiàng)目

本次流式檢測(cè)主要針對(duì)以下指標(biāo)：

1. 內(nèi)皮細(xì)胞表面標(biāo)志物表達(dá)：包括CD31（PECAM-1）、CD34及vWF（血管性血友病因子）的表達(dá)水平；
2. 細(xì)胞凋亡率：通過(guò)Annexin V-FITC/PI雙染法檢測(cè)凋亡細(xì)胞比例；
3. 細(xì)胞周期分布：分析G0/G1期、S期及G2/M期的細(xì)胞比例；
4. 活性氧（ROS）水平：采用DCFH-DA探針檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)ROS含量。

檢測(cè)方法

1. 樣品制備：

   • 收集對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞，胰酶消化后離心（1000 rpm，5 min），PBS洗滌兩次；
   • 根據(jù)不同檢測(cè)項(xiàng)目分組處理：
     • 表面標(biāo)志物檢測(cè)：細(xì)胞重懸后加入熒光標(biāo)記抗體（CD31-APC、CD34-PE、vWF-FITC），避光孵育30 min；
     • 凋亡檢測(cè)：加入Annexin V-FITC和PI染色液，室溫避光反應(yīng)15 min；
     • 細(xì)胞周期檢測(cè)：預(yù)冷70%乙醇固定，PI/RNase染色液避光孵育30 min；
     • ROS檢測(cè)：DCFH-DA探針?lè)跤?0 min后清洗。

2. 流式上機(jī)檢測(cè)：所有樣品經(jīng)300目濾網(wǎng)過(guò)濾后上樣，避免細(xì)胞團(tuán)塊干擾信號(hào)。

檢測(cè)儀器

實(shí)驗(yàn)采用BD FACSCanto II流式細(xì)胞儀（美國(guó)BD公司），配置三激光（488 nm、633 nm、405 nm）和六色檢測(cè)系統(tǒng)。儀器參數(shù)設(shè)置如下：

• 前向散射（FSC）與側(cè)向散射（SSC）用于區(qū)分細(xì)胞大小及顆粒度；
• 熒光通道：FITC（530/30 nm）、PE（585/42 nm）、APC（660/20 nm）；
• 數(shù)據(jù)采集與分析軟件：BD FACSDiva 8.0.1。

結(jié)果與討論

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示，HUVECs表面標(biāo)志物CD31、CD34及vWF的陽(yáng)性表達(dá)率分別為98.2%、92.5%和95.3%，符合內(nèi)皮細(xì)胞特性。凋亡率檢測(cè)顯示正常培養(yǎng)條件下細(xì)胞凋亡比例為4.7%，提示細(xì)胞狀態(tài)良好。細(xì)胞周期分析中，G0/G1期占比78.3%，表明大部分細(xì)胞處于靜息狀態(tài)。ROS水平檢測(cè)結(jié)果為熒光強(qiáng)度均值2560±120，為后續(xù)氧化應(yīng)激研究提供基線數(shù)據(jù)。

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)高效評(píng)估了內(nèi)皮細(xì)胞的生物學(xué)特征，為血管相關(guān)疾病機(jī)制研究及藥物篩選提供了可靠數(shù)據(jù)支持。

復(fù)制
導(dǎo)出
重新生成

實(shí)驗(yàn)儀器

測(cè)試流程

注意事項(xiàng)

1.具體的試驗(yàn)周期以工程師告知的為準(zhǔn)。

2.文章中的圖片或者標(biāo)準(zhǔn)以及具體的試驗(yàn)方案僅供參考，因?yàn)槊總€(gè)樣品和項(xiàng)目都有所不同，所以最終以工程師告知的為準(zhǔn)。

3.關(guān)于（樣品量）的需求，最好是先咨詢我們的工程師確定，避免不必要的樣品損失。

4.加急試驗(yàn)周期一般是五個(gè)工作日左右，部分樣品有所差異

5.如果對(duì)于（內(nèi)皮細(xì)胞流式檢測(cè)）還有什么疑問(wèn)，可以咨詢我們的工程師為您一一解答。