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雙熒光原位雜交檢測

原創(chuàng)發(fā)布者:北檢院    發(fā)布時間:2025-04-09     點(diǎn)擊數(shù):

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雙熒光原位雜交(FISH)檢測技術(shù)應(yīng)用與分析

檢測樣品

本實(shí)驗(yàn)采用的檢測樣品為人體腫瘤組織切片及外周血淋巴細(xì)胞樣本。所有樣本均經(jīng)過病理學(xué)診斷確認(rèn),并按照標(biāo)準(zhǔn)操作流程進(jìn)行固定、石蠟包埋或細(xì)胞懸液制備,以確保核酸完整性和探針雜交效率。

檢測項(xiàng)目

雙熒光原位雜交(Dual FISH)技術(shù)主要用于以下檢測項(xiàng)目:

  1. 基因擴(kuò)增與缺失分析:例如HER2基因擴(kuò)增、EGFR基因拷貝數(shù)變異等。
  2. 染色體易位檢測:如ALK基因重排、BCR-ABL融合基因等。
  3. 腫瘤微環(huán)境研究:同步分析腫瘤細(xì)胞與周圍基質(zhì)細(xì)胞的基因表達(dá)差異。

檢測方法

  1. 樣本預(yù)處理:組織切片經(jīng)脫蠟、蛋白酶消化及脫水處理;細(xì)胞樣本通過離心法制備成單層細(xì)胞涂片。
  2. 探針雜交:使用經(jīng)熒光標(biāo)記的DNA探針(如紅色熒光標(biāo)記HER2探針、綠色熒光標(biāo)記CEP17探針),與樣本DNA進(jìn)行特異性雜交。
  3. 洗脫與復(fù)染:通過梯度洗脫去除未結(jié)合探針,并用DAPI對細(xì)胞核進(jìn)行復(fù)染以定位信號。
  4. 信號捕獲與分析:在熒光顯微鏡下觀察并記錄紅、綠熒光信號的數(shù)量及分布,計(jì)算目標(biāo)基因與內(nèi)參基因的比值。

檢測儀器

  1. 熒光顯微鏡:配備多波段濾光片的奧林巴斯BX63或蔡司Axio Imager,支持紅、綠、藍(lán)三色熒光通道成像。
  2. 圖像分析系統(tǒng):采用MetaSystems或Leica LAS X軟件,實(shí)現(xiàn)熒光信號自動計(jì)數(shù)與空間定位。
  3. 雜交儀:如Abbott StatSpin ThermoBrite,用于精確控制探針雜交的溫度與時間。

技術(shù)優(yōu)勢與應(yīng)用領(lǐng)域

雙熒光FISH技術(shù)通過同步標(biāo)記兩種不同靶點(diǎn),顯著提高了檢測的準(zhǔn)確性和效率,尤其適用于以下領(lǐng)域:

  • 腫瘤精準(zhǔn)診斷:輔助臨床制定靶向治療方案(如乳腺癌HER2檢測)。
  • 遺傳病篩查:快速識別染色體微缺失或微重復(fù)綜合征。
  • 科研探索:揭示基因相互作用及空間表達(dá)模式。

注意事項(xiàng)

  1. 實(shí)驗(yàn)需在避光環(huán)境下操作,避免熒光淬滅。
  2. 探針儲存應(yīng)嚴(yán)格遵循-20℃避光條件。
  3. 數(shù)據(jù)分析需結(jié)合病理形態(tài)學(xué)評估,排除非特異性信號干擾。

通過雙熒光FISH技術(shù),能夠?qū)崿F(xiàn)基因水平的可視化分析,為疾病機(jī)制研究及臨床診療提供高分辨率、高靈敏度的分子證據(jù)。

實(shí)驗(yàn)儀器

實(shí)驗(yàn)室儀器 實(shí)驗(yàn)室儀器 實(shí)驗(yàn)室儀器 實(shí)驗(yàn)室儀器

測試流程

雙熒光原位雜交檢測流程

注意事項(xiàng)

1.具體的試驗(yàn)周期以工程師告知的為準(zhǔn)。

2.文章中的圖片或者標(biāo)準(zhǔn)以及具體的試驗(yàn)方案僅供參考,因?yàn)槊總€樣品和項(xiàng)目都有所不同,所以最終以工程師告知的為準(zhǔn)。

3.關(guān)于(樣品量)的需求,最好是先咨詢我們的工程師確定,避免不必要的樣品損失。

4.加急試驗(yàn)周期一般是五個工作日左右,部分樣品有所差異

5.如果對于(雙熒光原位雜交檢測)還有什么疑問,可以咨詢我們的工程師為您一一解答。

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