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液質(zhì)細(xì)胞檢測

原創(chuàng)發(fā)布者:北檢院    發(fā)布時間:2025-04-09     點擊數(shù):

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液質(zhì)細(xì)胞檢測技術(shù)在現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)研究中的應(yīng)用

隨著生物醫(yī)學(xué)研究的不斷深入,液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)(LC-MS/MS)憑借其高靈敏度、高特異性和高通量分析的優(yōu)勢,逐漸成為細(xì)胞水平研究的重要工具。本文以某生物實驗室的檢測流程為例,介紹液質(zhì)細(xì)胞檢測的關(guān)鍵環(huán)節(jié),包括檢測樣品、檢測項目、檢測方法及儀器設(shè)備。

檢測樣品

本次檢測的樣品為體外培養(yǎng)的人源肝癌細(xì)胞(HepG2),經(jīng)過特定藥物處理(如化療藥物或靶向抑制劑)后,收集細(xì)胞裂解液及細(xì)胞培養(yǎng)上清液。樣品需在-80℃超低溫環(huán)境中保存,避免蛋白質(zhì)降解或代謝物分解,確保檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。

檢測項目

檢測主要聚焦于以下兩類生物分子:

  1. 小分子代謝物:包括氨基酸、脂質(zhì)、核苷酸等,用于分析藥物干預(yù)后細(xì)胞的能量代謝變化。
  2. 蛋白質(zhì)及多肽:針對特定信號通路蛋白(如AKT、mTOR)的磷酸化水平進行定量,評估藥物對細(xì)胞增殖或凋亡的影響。

檢測方法

  1. 樣品前處理

    • 細(xì)胞裂解液通過離心去除細(xì)胞碎片,采用固相萃?。⊿PE)或有機溶劑沉淀法純化目標(biāo)分子。
    • 代謝物提取使用甲醇-水混合溶劑,蛋白質(zhì)酶解則通過胰蛋白酶消化生成多肽片段。
  2. 液相色譜分離

    • 采用反相C18色譜柱,以梯度洗脫模式分離復(fù)雜樣品中的分子,流動相為水-乙腈體系(含0.1%甲酸)。
  3. 質(zhì)譜分析

    • 使用電噴霧離子源(ESI)將分子離子化,通過三重四極桿質(zhì)譜(QqQ)進行多反應(yīng)監(jiān)測(MRM),實現(xiàn)目標(biāo)分子的高靈敏度定量。
  4. 數(shù)據(jù)處理

    • 原始數(shù)據(jù)經(jīng)專業(yè)軟件(如Analyst或Skyline)進行峰積分、背景扣除及歸一化處理,最終生成定量分析報告。

檢測儀器

本次實驗采用以下核心設(shè)備:

  • 液相色譜儀:Agilent 1290 Infinity II,配備自動進樣器和柱溫箱,支持超高效分離。
  • 質(zhì)譜儀:Sciex Triple Quad 6500+,具備高分辨率掃描功能,適用于低豐度分子的精準(zhǔn)檢測。
  • 輔助設(shè)備:低溫離心機(Eppendorf 5430R)、超聲波破碎儀(Scientz-IID)及超純水系統(tǒng)(Milli-Q)。

質(zhì)量控制與結(jié)果驗證

為確保數(shù)據(jù)可靠性,實驗全程設(shè)置質(zhì)量控制(QC)樣本,包括空白對照、加標(biāo)回收率試驗及內(nèi)標(biāo)校正(如穩(wěn)定同位素標(biāo)記的代謝物)。檢測結(jié)果需滿足以下標(biāo)準(zhǔn):

  • 保留時間偏差<0.1分鐘;
  • 質(zhì)譜峰信噪比(S/N)>10;
  • 加標(biāo)回收率在80%-120%范圍內(nèi)。

結(jié)論

液質(zhì)細(xì)胞檢測技術(shù)能夠從分子層面揭示藥物作用機制、疾病標(biāo)志物及代謝調(diào)控網(wǎng)絡(luò),為腫瘤治療、免疫研究及藥物開發(fā)提供關(guān)鍵數(shù)據(jù)支持。隨著儀器靈敏度的提升和數(shù)據(jù)庫的完善,該技術(shù)將在精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)領(lǐng)域發(fā)揮更重要的作用。

聲明:本文內(nèi)容基于實驗室常規(guī)操作流程,具體實驗方案需根據(jù)實際需求調(diào)整。

實驗儀器

實驗室儀器 實驗室儀器 實驗室儀器 實驗室儀器

測試流程

液質(zhì)細(xì)胞檢測流程

注意事項

1.具體的試驗周期以工程師告知的為準(zhǔn)。

2.文章中的圖片或者標(biāo)準(zhǔn)以及具體的試驗方案僅供參考,因為每個樣品和項目都有所不同,所以最終以工程師告知的為準(zhǔn)。

3.關(guān)于(樣品量)的需求,最好是先咨詢我們的工程師確定,避免不必要的樣品損失。

4.加急試驗周期一般是五個工作日左右,部分樣品有所差異

5.如果對于(液質(zhì)細(xì)胞檢測)還有什么疑問,可以咨詢我們的工程師為您一一解答。

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