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注意：因業(yè)務(wù)調(diào)整，暫不接受個(gè)人委托測(cè)試望見(jiàn)諒。

小鼠調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg）流式檢測(cè)方案解析

導(dǎo)語(yǔ) 調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg）在免疫穩(wěn)態(tài)和耐受中發(fā)揮關(guān)鍵作用，其功能異常與多種疾病相關(guān)。流式細(xì)胞術(shù)是檢測(cè)Treg細(xì)胞表型和比例的核心技術(shù)。本文針對(duì)小鼠Treg細(xì)胞的流式檢測(cè)方案進(jìn)行詳細(xì)解析，涵蓋樣品類型、檢測(cè)指標(biāo)、實(shí)驗(yàn)方法及儀器信息。

一、檢測(cè)樣品

實(shí)驗(yàn)樣品通常來(lái)源于C57BL/6或BALB/c品系小鼠的免疫組織，包括：

1. 脾臟：通過(guò)機(jī)械研磨聯(lián)合紅細(xì)胞裂解液制備單細(xì)胞懸液。
2. 淋巴結(jié)：取腘窩或腸系膜淋巴結(jié)，經(jīng)研磨過(guò)濾后獲得細(xì)胞。
3. 胸腺：幼鼠胸腺組織經(jīng)勻漿后分離胸腺細(xì)胞。
4. 外周血：肝素抗凝血經(jīng)密度梯度離心分離外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC）。

樣品制備需確保細(xì)胞活性（活細(xì)胞率>90%）和單細(xì)胞分散性，避免結(jié)塊影響檢測(cè)結(jié)果。

二、檢測(cè)項(xiàng)目

Treg細(xì)胞的典型表型為CD4+CD25+Foxp3+，常用檢測(cè)指標(biāo)包括：

• 表面標(biāo)志物：CD4（標(biāo)記輔助T細(xì)胞）、CD25（IL-2受體α鏈）。
• 胞內(nèi)標(biāo)志物：Foxp3（Treg特異性轉(zhuǎn)錄因子）。
• 輔助標(biāo)記：CTLA-4、GITR等活化相關(guān)分子（可選）。

檢測(cè)需設(shè)置同型對(duì)照和熒光補(bǔ)償對(duì)照，以排除非特異性信號(hào)干擾。

三、檢測(cè)方法

1. 樣本預(yù)處理

• 組織樣本經(jīng)研磨后過(guò)70 μm細(xì)胞篩，紅細(xì)胞裂解液處理5分鐘去除紅細(xì)胞。
• 外周血或骨髓樣本采用Ficoll密度梯度離心法分離單核細(xì)胞。

2. 抗體染色

• 表面染色：CD4-FITC、CD25-APC抗體避光孵育30分鐘（4℃）。
• 固定與破膜：使用Foxp3專用固定/破膜劑處理細(xì)胞，加入Foxp3-PE抗體孵育45分鐘。

3. 流式檢測(cè)

• 上機(jī)前用40 μm濾網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞濃度為1×10^6/mL。
• 采集至少10,000個(gè)CD4+細(xì)胞，通過(guò)雙參數(shù)散點(diǎn)圖分析CD25和Foxp3共表達(dá)比例。

四、檢測(cè)儀器

實(shí)驗(yàn)需配備以下設(shè)備：

• 流式細(xì)胞儀：BD FACSCanto II或Beckman CytoFLEX，配置488 nm和633 nm激光器，支持FITC、PE、APC多色檢測(cè)。
• 離心機(jī)：提供100–500×g離心條件（Eppendorf 5430R）。
• 細(xì)胞計(jì)數(shù)儀：如CountStar或臺(tái)盼藍(lán)手動(dòng)計(jì)數(shù)。
• 恒溫孵育箱：維持37℃培養(yǎng)環(huán)境（可選用于活化實(shí)驗(yàn)）。

儀器使用前需校準(zhǔn)熒光通道，確保CV值（變異系數(shù)）<5%。

結(jié)語(yǔ) 流式細(xì)胞術(shù)為Treg細(xì)胞的精準(zhǔn)鑒定提供了高效手段。通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)化操作和嚴(yán)格的對(duì)照設(shè)置，可準(zhǔn)確獲取Treg比例及其功能狀態(tài)數(shù)據(jù)，為免疫機(jī)制研究和藥物開發(fā)提供技術(shù)支持。

實(shí)驗(yàn)儀器

測(cè)試流程

注意事項(xiàng)

1.具體的試驗(yàn)周期以工程師告知的為準(zhǔn)。

2.文章中的圖片或者標(biāo)準(zhǔn)以及具體的試驗(yàn)方案僅供參考，因?yàn)槊總€(gè)樣品和項(xiàng)目都有所不同，所以最終以工程師告知的為準(zhǔn)。

3.關(guān)于（樣品量）的需求，最好是先咨詢我們的工程師確定，避免不必要的樣品損失。

4.加急試驗(yàn)周期一般是五個(gè)工作日左右，部分樣品有所差異

5.如果對(duì)于（小鼠treg細(xì)胞流式檢測(cè)）還有什么疑問(wèn)，可以咨詢我們的工程師為您一一解答。