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注意：因業(yè)務(wù)調(diào)整，暫不接受個人委托測試望見諒。

流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞殺傷活性的應(yīng)用與流程

細(xì)胞殺傷活性檢測是評估免疫細(xì)胞（如NK細(xì)胞、細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞）或藥物抗腫瘤效果的重要實(shí)驗(yàn)手段。流式細(xì)胞術(shù)因其高靈敏度、多參數(shù)分析能力，成為檢測細(xì)胞殺傷活性的主流方法之一。以下將詳細(xì)介紹實(shí)驗(yàn)的樣品、項(xiàng)目、方法及儀器。

檢測樣品 本實(shí)驗(yàn)主要檢測兩類樣品：

1. 靶細(xì)胞：通常為腫瘤細(xì)胞系（如K562、HeLa），用于模擬體內(nèi)被攻擊的病變細(xì)胞。
2. 效應(yīng)細(xì)胞：包括外周血單核細(xì)胞（PBMC）分離的NK細(xì)胞、CAR-T細(xì)胞或其他具有細(xì)胞毒性的免疫細(xì)胞。

實(shí)驗(yàn)前需對靶細(xì)胞進(jìn)行熒光標(biāo)記（如CFSE或CellTrace™染料），效應(yīng)細(xì)胞則保持未標(biāo)記狀態(tài)，以便后續(xù)區(qū)分。

檢測項(xiàng)目 檢測的核心目標(biāo)是量化效應(yīng)細(xì)胞對靶細(xì)胞的殺傷效率，具體指標(biāo)包括：

1. 靶細(xì)胞凋亡與壞死比例：通過膜聯(lián)蛋白V（Annexin V）和碘化丙啶（PI）雙染色區(qū)分早期凋亡、晚期凋亡及壞死細(xì)胞。
2. 細(xì)胞存活率：通過熒光標(biāo)記靶細(xì)胞的減少比例計算殺傷率。
3. 特異性殺傷活性：排除自然死亡后，評估效應(yīng)細(xì)胞的針對性殺傷能力。

檢測方法

1. 共培養(yǎng)體系構(gòu)建

   • 將標(biāo)記CFSE的靶細(xì)胞與效應(yīng)細(xì)胞按不同比例（如10:1、5:1）混合，置于37℃、5% CO?培養(yǎng)箱中孵育4-24小時。
   • 設(shè)置僅含靶細(xì)胞的陰性對照組，用于校正自然死亡率。

2. 熒光標(biāo)記與染色

   • 收集共培養(yǎng)后的細(xì)胞，加入Annexin V-FITC和PI染色液，避光孵育15分鐘。
   • 使用PBS洗滌后重懸于流式緩沖液中。

3. 流式細(xì)胞儀分析

   • 通過CFSE信號區(qū)分靶細(xì)胞與效應(yīng)細(xì)胞，結(jié)合Annexin V和PI的熒光強(qiáng)度，分析靶細(xì)胞的凋亡與壞死情況。

檢測儀器

1. 流式細(xì)胞儀：

   • 推薦型號：BD FACSCanto™ II、Beckman CytoFLEX。
   • 配置要求：至少配備488 nm和640 nm激光器，可檢測FITC、PI等熒光信號。

2. 配套分析軟件：

   • BD FACSDiva™、FlowJo™或Kaluza，用于數(shù)據(jù)采集與統(tǒng)計學(xué)分析。

3. 輔助設(shè)備：

   • 細(xì)胞培養(yǎng)箱（37℃、5% CO?）、離心機(jī)（300×g）、微量移液器等。

總結(jié) 流式細(xì)胞術(shù)可通過多色熒光標(biāo)記精準(zhǔn)區(qū)分靶細(xì)胞與效應(yīng)細(xì)胞，并定量分析殺傷活性，適用于藥物篩選、免疫治療評估及基礎(chǔ)免疫學(xué)研究。該方法操作標(biāo)準(zhǔn)化、結(jié)果重復(fù)性高，為細(xì)胞功能研究提供了可靠的技術(shù)支持。

實(shí)驗(yàn)儀器

測試流程

注意事項(xiàng)

1.具體的試驗(yàn)周期以工程師告知的為準(zhǔn)。

2.文章中的圖片或者標(biāo)準(zhǔn)以及具體的試驗(yàn)方案僅供參考，因?yàn)槊總€樣品和項(xiàng)目都有所不同，所以最終以工程師告知的為準(zhǔn)。

3.關(guān)于（樣品量）的需求，最好是先咨詢我們的工程師確定，避免不必要的樣品損失。

4.加急試驗(yàn)周期一般是五個工作日左右，部分樣品有所差異

5.如果對于（流式檢測細(xì)胞殺傷檢測）還有什么疑問，可以咨詢我們的工程師為您一一解答。