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注意：因業(yè)務(wù)調(diào)整，暫不接受個人委托測試望見諒。

流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡實驗分析

檢測樣品

本實驗的檢測樣品為體外培養(yǎng)的哺乳動物細(xì)胞系，包括人宮頸癌細(xì)胞（HeLa）、人肺癌細(xì)胞（A549）及小鼠成纖維細(xì)胞（NIH/3T3）。所有細(xì)胞均接種于含10%胎牛血清（FBS）的DMEM培養(yǎng)基中，在37℃、5% CO?培養(yǎng)箱中擴(kuò)增至對數(shù)生長期。實驗組細(xì)胞經(jīng)不同濃度化療藥物（如順鉑、紫杉醇）或紫外線輻射誘導(dǎo)凋亡，對照組為未經(jīng)處理的正常細(xì)胞。收集細(xì)胞前，用胰酶消化后離心（1000 rpm，5分鐘），PBS洗滌兩次，最終重懸于預(yù)冷緩沖液中，冰上保存待測。

檢測項目

1. 細(xì)胞凋亡比例分析：通過Annexin V-FITC/PI雙染法區(qū)分早期凋亡（Annexin V?/PI?）與晚期凋亡或壞死（Annexin V?/PI?）細(xì)胞。
2. 線粒體膜電位變化：采用JC-1熒光探針檢測線粒體膜電位下降，評估凋亡早期線粒體功能狀態(tài)。
3. Caspase-3活性檢測：使用FITC標(biāo)記的Caspase-3抑制劑（FITC-DEVD-FMK）標(biāo)記激活的Caspase-3，定量凋亡相關(guān)酶活性。
4. DNA斷裂分析：通過TUNEL法（末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的dUTP缺口末端標(biāo)記）檢測凋亡細(xì)胞中DNA斷裂情況。

檢測方法

1. 樣品制備：
   • 收集細(xì)胞后，用預(yù)冷PBS洗滌兩次，調(diào)整細(xì)胞密度至1×10?/mL。
   • Annexin V-FITC/PI染色：取100 μL細(xì)胞懸液，加入5 μL Annexin V-FITC和5 μL PI染液（避光孵育15分鐘）。
   • JC-1染色：按說明書比例加入JC-1工作液，37℃孵育20分鐘后離心去除多余染料。
2. 流式細(xì)胞儀檢測：
   • 上機前用300目濾網(wǎng)過濾細(xì)胞懸液，避免堵塞流式細(xì)胞儀噴嘴。
   • 設(shè)置FL1（FITC）和FL2（PE）通道檢測Annexin V/PI信號，F(xiàn)L1/FL3通道分析JC-1單體（綠色）與聚合物（紅色）熒光強度。
   • 每樣本采集10,000個細(xì)胞信號，通過閾值排除碎片干擾。
3. 數(shù)據(jù)分析：
   • 使用FlowJo軟件劃分活細(xì)胞、早期凋亡及晚期凋亡細(xì)胞群，計算各象限細(xì)胞百分比。
   • JC-1實驗以紅綠熒光比值降低判定線粒體膜電位喪失。

檢測儀器

1. 流式細(xì)胞儀：
   • 儀器型號：BD FACSCanto™ II（美國BD公司）
   • 配置參數(shù)：3激光（488 nm藍(lán)激光、633 nm紅激光、405 nm紫激光），8通道熒光檢測系統(tǒng)。
   • 軟件系統(tǒng)：BD FACSDiva™ 8.0.1，支持多色熒光補償調(diào)節(jié)與實時數(shù)據(jù)采集。
2. 輔助設(shè)備：
   • 離心機：Eppendorf 5810R（德國Eppendorf公司），轉(zhuǎn)速范圍100-15,000 rpm。
   • 細(xì)胞培養(yǎng)箱：Thermo Scientific Heracell 150i，溫度精度±0.2℃，CO?濃度控制誤差≤1%。
   • 熒光顯微鏡：Nikon Eclipse Ti2，用于預(yù)實驗染色效果觀察。

結(jié)論 流式細(xì)胞術(shù)可高效、多參數(shù)地定量細(xì)胞凋亡動態(tài)過程，結(jié)合特異性熒光探針與高靈敏度檢測系統(tǒng)，為藥物篩選、毒性評估及凋亡機制研究提供可靠數(shù)據(jù)支持。

實驗儀器

測試流程

注意事項

1.具體的試驗周期以工程師告知的為準(zhǔn)。

2.文章中的圖片或者標(biāo)準(zhǔn)以及具體的試驗方案僅供參考，因為每個樣品和項目都有所不同，所以最終以工程師告知的為準(zhǔn)。

3.關(guān)于（樣品量）的需求，最好是先咨詢我們的工程師確定，避免不必要的樣品損失。

4.加急試驗周期一般是五個工作日左右，部分樣品有所差異

5.如果對于（流式細(xì)胞檢測細(xì)胞凋亡檢測）還有什么疑問，可以咨詢我們的工程師為您一一解答。