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蛋白修飾位點檢測

原創(chuàng)發(fā)布者:北檢院    發(fā)布時間:2025-04-09     點擊數(shù):

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蛋白修飾位點檢測技術(shù)及應(yīng)用

蛋白翻譯后修飾(Post-Translational Modification, PTM)是調(diào)控蛋白質(zhì)功能、細(xì)胞信號傳導(dǎo)及疾病發(fā)生的重要機制。針對蛋白修飾位點的精準(zhǔn)檢測,可為生命科學(xué)研究和臨床診斷提供關(guān)鍵數(shù)據(jù)支持。以下從檢測樣品、檢測項目、檢測方法及檢測儀器四方面,系統(tǒng)介紹蛋白修飾位點檢測的核心內(nèi)容。

一、檢測樣品

蛋白修飾位點檢測適用于多種生物樣本,包括:

  • 細(xì)胞樣本:如哺乳動物細(xì)胞、原代細(xì)胞、干細(xì)胞等;
  • 組織樣本:如腫瘤組織、腦組織、肝臟組織等;
  • 體液樣本:如血清、血漿、尿液等;
  • 重組蛋白:通過基因工程技術(shù)表達(dá)的特定蛋白。

樣品需經(jīng)過標(biāo)準(zhǔn)化前處理,包括裂解、純化、定量等步驟,以確保檢測結(jié)果的可靠性。

二、檢測項目

蛋白修飾類型多樣,常見檢測項目包括:

  1. 磷酸化修飾(Phosphorylation):參與細(xì)胞增殖、凋亡及信號轉(zhuǎn)導(dǎo);
  2. 乙?;揎?/strong>(Acetylation):調(diào)控基因表達(dá)和代謝通路;
  3. 泛素化修飾(Ubiquitination):介導(dǎo)蛋白質(zhì)降解及DNA修復(fù);
  4. 糖基化修飾(Glycosylation):影響蛋白穩(wěn)定性和免疫識別;
  5. 甲基化修飾(Methylation):參與表觀遺傳調(diào)控及染色質(zhì)重塑。

此外,還可針對特定需求檢測羥基化、SUMO化等稀有修飾類型。

三、檢測方法

根據(jù)修飾類型及研究目的,主要采用以下檢測技術(shù):

1. 質(zhì)譜法(Mass Spectrometry, MS)

  • 原理:通過電離蛋白肽段,分析其質(zhì)荷比(m/z)及碎片離子,精準(zhǔn)定位修飾位點;
  • 優(yōu)勢:高通量、高靈敏度,適用于未知修飾位點的發(fā)現(xiàn);
  • 流程:樣品酶解→液相色譜分離→質(zhì)譜分析→生物信息學(xué)解析。

2. 抗體依賴性檢測

  • Western Blot:利用修飾特異性抗體,通過電泳及顯色技術(shù)驗證目標(biāo)修飾;
  • 免疫沉淀(IP):富集修飾蛋白后結(jié)合質(zhì)譜或Western Blot分析;
  • 免疫熒光(IF):定位修飾蛋白在細(xì)胞或組織中的分布。

3. 熒光標(biāo)記技術(shù) 采用熒光探針標(biāo)記修飾基團,通過熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀實現(xiàn)定量檢測。

四、檢測儀器

蛋白修飾位點檢測依賴高精度儀器設(shè)備,核心儀器包括:

  • 高分辨質(zhì)譜儀:如Thermo Fisher Orbitrap系列、AB SCIEX TripleTOF系統(tǒng),支持全掃描和靶向修飾分析;
  • 液相色譜儀:Agilent 1260/1290系列,用于肽段分離;
  • 成像系統(tǒng):如Bio-Rad ChemiDoc(Western Blot成像)、Leica共聚焦顯微鏡(免疫熒光);
  • 自動化工作站:Hamilton STARlet(樣本前處理自動化)。

總結(jié)

蛋白修飾位點檢測技術(shù)已廣泛應(yīng)用于癌癥機制研究、神經(jīng)退行性疾病診斷及藥物靶點開發(fā)等領(lǐng)域。通過整合高靈敏度質(zhì)譜、特異性抗體及自動化平臺,可實現(xiàn)對復(fù)雜樣本中修飾位點的精準(zhǔn)解析,為生命科學(xué)研究與轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)提供強有力的技術(shù)支撐。

(本文內(nèi)容僅供參考,具體檢測方案需結(jié)合實驗設(shè)計及樣本特性制定。)

實驗儀器

實驗室儀器 實驗室儀器 實驗室儀器 實驗室儀器

測試流程

蛋白修飾位點檢測流程

注意事項

1.具體的試驗周期以工程師告知的為準(zhǔn)。

2.文章中的圖片或者標(biāo)準(zhǔn)以及具體的試驗方案僅供參考,因為每個樣品和項目都有所不同,所以最終以工程師告知的為準(zhǔn)。

3.關(guān)于(樣品量)的需求,最好是先咨詢我們的工程師確定,避免不必要的樣品損失。

4.加急試驗周期一般是五個工作日左右,部分樣品有所差異

5.如果對于(蛋白修飾位點檢測)還有什么疑問,可以咨詢我們的工程師為您一一解答。

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