磷酸蛋白質組學檢測

原創(chuàng)發(fā)布者：北檢院發(fā)布時間：2025-04-09 點擊數(shù)：

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<!DOCTYPE html> <html> <head> <title>磷酸蛋白質組學檢測技術及應用分析</title> </head> <body> <h1>磷酸蛋白質組學檢測技術及應用分析</h1> <h2>檢測樣品</h2> 本研究選取的檢測樣品為人類肝癌細胞系（HepG2）和正常肝細胞系（LO2），通過細胞培養(yǎng)獲取樣本。所有樣品在裂解后經(jīng)磷酸酶抑制劑處理，以維持蛋白質磷酸化狀態(tài)的穩(wěn)定性。樣品最終以凍干形式保存，確保檢測前無降解。 <h2>檢測項目</h2> 本次檢測主要針對以下內容展開：<br> 1. 磷酸化位點定性分析：鑒定樣品中蛋白質的磷酸化修飾位點；<br> 2. 磷酸化水平定量分析：比較肝癌細胞與正常細胞中磷酸化蛋白的表達差異；<br> 3. 信號通路富集分析：篩選與癌癥發(fā)生相關的磷酸化調控通路。 <h2>檢測方法</h2> 采用液相色譜-串聯(lián)質譜（LC-MS/MS）技術結合磷酸化肽段富集策略。具體流程如下：<br> （1）蛋白質酶解：使用胰蛋白酶對樣品進行酶切，生成肽段；<br> （2）磷酸化肽段富集：通過TiO2磁珠選擇性富集磷酸化修飾肽段；<br> （3）質譜分析：采用數(shù)據(jù)依賴采集模式（DDA）進行質譜掃描；<br> （4）數(shù)據(jù)處理：利用MaxQuant軟件匹配數(shù)據(jù)庫，完成磷酸化位點注釋及定量分析。 <h2>檢測儀器</h2> 實驗使用以下核心設備：<br> - 超高效液相色譜儀（UHPLC）：Thermo Scientific Ultimate 3000系統(tǒng)，用于肽段分離；<br> - 高分辨率質譜儀：Thermo Scientific Q Exactive HF-X，配備納升電噴霧離子源（nano-ESI）；<br> - 磷酸化富集裝置：TiO2磁珠結合KingFisher Flex全自動純化系統(tǒng)。 <h2>技術優(yōu)勢與應用</h2> 本方法通過高靈敏度質譜平臺實現(xiàn)了低豐度磷酸化蛋白的精準檢測，最低檢測限達0.1 fmol。研究發(fā)現(xiàn)，肝癌細胞中MAPK和PI3K/AKT信號通路的磷酸化水平顯著上調，為腫瘤標志物篩選提供了新靶點。該技術可廣泛應用于疾病機制研究、藥物靶點驗證及臨床診斷開發(fā)。 </body> </html>