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細(xì)胞代謝組檢測技術(shù)與應(yīng)用分析

檢測樣品

本研究選取了哺乳動物細(xì)胞系（HEK293、HepG2）及原代小鼠肝細(xì)胞作為檢測樣本。所有樣品均通過無菌培養(yǎng)技術(shù)處理，培養(yǎng)條件為37℃、5% CO?環(huán)境，培養(yǎng)基為含10%胎牛血清的DMEM高糖培養(yǎng)基。樣品在收集后立即進(jìn)行液氮速凍，并于-80℃超低溫冰箱中保存，運(yùn)輸過程使用干冰維持低溫環(huán)境，確保代謝物穩(wěn)定性。

檢測項(xiàng)目

本次代謝組檢測涵蓋氨基酸、糖類、有機(jī)酸、核苷酸、脂質(zhì)及次級代謝產(chǎn)物等六大類目標(biāo)物，總計(jì)分析超過500種代謝物。重點(diǎn)檢測項(xiàng)目包括：

• 能量代謝相關(guān)物質(zhì)（如ATP、NADH、乳酸）；
• 氧化應(yīng)激標(biāo)志物（谷胱甘肽、丙二醛）；
• 信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子（cAMP、IP3）；
• 細(xì)胞增殖與凋亡關(guān)聯(lián)代謝物（精胺、亞精胺、鞘氨醇）。

檢測方法

采用**液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（LC-MS/MS）**進(jìn)行代謝組學(xué)分析，具體流程如下：

1. 樣品前處理：細(xì)胞裂解后使用80%甲醇水溶液提取代謝物，離心去除蛋白沉淀，上清液經(jīng)真空濃縮后復(fù)溶；
2. 色譜分離：選用C18反相色譜柱（2.1×100 mm, 1.7 μm），流動相為0.1%甲酸水溶液和乙腈，梯度洗脫時(shí)長20分鐘；
3. 質(zhì)譜檢測：采用電噴霧電離（ESI）源，正負(fù)離子模式切換掃描，質(zhì)量掃描范圍m/z 50-1000；
4. 數(shù)據(jù)分析：通過Compound Discoverer 3.1軟件進(jìn)行峰提取、代謝物鑒定及通路富集分析。

檢測儀器

實(shí)驗(yàn)主要依賴以下高精度儀器完成：

• 超高效液相色譜儀：Waters ACQUITY UPLC H-Class系統(tǒng)，配備自動進(jìn)樣器和柱溫箱；
• 高分辨質(zhì)譜儀：Thermo Scientific Q Exactive HF-X Hybrid Quadrupole-Orbitrap，質(zhì)量精度<3 ppm；
• 輔助設(shè)備：Eppendorf Centrifuge 5430R高速冷凍離心機(jī)、Labconco FreeZone真空濃縮儀。

結(jié)語

細(xì)胞代謝組檢測能夠系統(tǒng)性解析生理或病理狀態(tài)下的代謝網(wǎng)絡(luò)變化，為疾病機(jī)制研究、藥物靶點(diǎn)篩選及精準(zhǔn)醫(yī)療提供關(guān)鍵數(shù)據(jù)支持。本研究通過標(biāo)準(zhǔn)化的檢測流程與先進(jìn)儀器平臺，實(shí)現(xiàn)了對細(xì)胞代謝狀態(tài)的全面表征，后續(xù)將進(jìn)一步結(jié)合多組學(xué)數(shù)據(jù)開展深入分析。

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實(shí)驗(yàn)儀器

測試流程

注意事項(xiàng)

1.具體的試驗(yàn)周期以工程師告知的為準(zhǔn)。

2.文章中的圖片或者標(biāo)準(zhǔn)以及具體的試驗(yàn)方案僅供參考，因?yàn)槊總€樣品和項(xiàng)目都有所不同，所以最終以工程師告知的為準(zhǔn)。

3.關(guān)于（樣品量）的需求，最好是先咨詢我們的工程師確定，避免不必要的樣品損失。

4.加急試驗(yàn)周期一般是五個工作日左右，部分樣品有所差異

5.如果對于（細(xì)胞代謝組檢測）還有什么疑問，可以咨詢我們的工程師為您一一解答。