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斑馬魚試驗檢測

原創(chuàng)發(fā)布者:北檢院    發(fā)布時間:2025-04-08     點擊數(shù):

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斑馬魚試驗檢測報告:樣品、項目與方法詳解

檢測樣品

本次試驗的檢測樣品為實驗室繁育的成年斑馬魚(Danio rerio)及胚胎。斑馬魚品系為AB野生型,胚胎發(fā)育階段為受精后6小時至120小時(6-120 hpf)。成魚體長為3-4厘米,健康狀況良好,無肉眼可見病變。樣品分為實驗組與對照組,每組包含30尾成魚及200枚胚胎,所有樣品均在標(biāo)準(zhǔn)養(yǎng)殖條件下(水溫28°C,pH 7.0-7.5,光照周期14小時光照/10小時黑暗)馴養(yǎng)一周后投入試驗。

檢測項目

本次試驗主要針對以下項目進行檢測:

  1. 急性毒性測試:評估環(huán)境污染物對斑馬魚胚胎及成魚的半數(shù)致死濃度(LC50)。
  2. 基因表達分析:通過qPCR技術(shù)檢測與氧化應(yīng)激、細胞凋亡相關(guān)的基因(如SOD、Caspase-3)的表達水平。
  3. 行為學(xué)觀察:記錄成魚在污染物暴露后的運動軌跡、擺尾頻率及群體行為變化。
  4. 組織病理學(xué)檢測:對肝臟、鰓組織進行切片觀察,分析污染物引起的組織結(jié)構(gòu)損傷。

檢測方法

  1. 樣品處理

    • 胚胎暴露試驗:將胚胎置于含不同濃度污染物的6孔板中,每孔加入10 mL暴露液,對照組為清潔養(yǎng)殖水。
    • 成魚暴露試驗:成魚置于10 L玻璃缸中,暴露液濃度梯度設(shè)置為0%(對照)、25%、50%、100%原液,持續(xù)暴露96小時。
  2. 數(shù)據(jù)采集

    • 毒性終點記錄:統(tǒng)計24小時、48小時、72小時和96小時的胚胎死亡率及成魚存活率。
    • 基因表達定量:采集胚胎或成魚組織樣本,提取RNA并反轉(zhuǎn)錄為cDNA,通過SYBR Green熒光染料進行qPCR擴增。
    • 行為學(xué)分析:使用視頻追蹤系統(tǒng)(EthoVision XT)記錄成魚運動軌跡,計算平均游速和趨避反應(yīng)強度。
  3. 病理學(xué)檢測

    • 取暴露后斑馬魚的肝臟和鰓組織,經(jīng)4%多聚甲醛固定、石蠟包埋后切片,蘇木精-伊紅(H&E)染色,顯微鏡下觀察病理變化。

檢測儀器

試驗中使用的核心儀器及設(shè)備如下:

  1. 體視顯微鏡(型號:Leica M205 C):用于觀察胚胎發(fā)育異常及組織取樣。
  2. 熒光定量PCR儀(型號:Bio-Rad CFX96):完成基因表達的定量分析。
  3. 全自動行為分析系統(tǒng)(型號:Noldus EthoVision XT 15):實時追蹤并量化斑馬魚運動行為。
  4. 顯微成像系統(tǒng)(型號:Olympus BX53):拍攝組織切片圖像,配備DP80雙色冷CCD相機。
  5. 水質(zhì)多參數(shù)分析儀(型號:YSI ProPlus):監(jiān)測暴露液溶解氧、電導(dǎo)率及溫度,確保試驗條件穩(wěn)定。

結(jié)語

本次斑馬魚試驗通過多維度的檢測項目與標(biāo)準(zhǔn)化方法,系統(tǒng)評估了目標(biāo)污染物的生物毒性效應(yīng)。結(jié)合基因、行為及病理層面的數(shù)據(jù),為環(huán)境風(fēng)險評估及毒理機制研究提供了科學(xué)依據(jù)。未來將進一步優(yōu)化暴露模型,提升檢測效率與精準(zhǔn)度。

實驗儀器

實驗室儀器 實驗室儀器 實驗室儀器 實驗室儀器

測試流程

斑馬魚試驗檢測流程

注意事項

1.具體的試驗周期以工程師告知的為準(zhǔn)。

2.文章中的圖片或者標(biāo)準(zhǔn)以及具體的試驗方案僅供參考,因為每個樣品和項目都有所不同,所以最終以工程師告知的為準(zhǔn)。

3.關(guān)于(樣品量)的需求,最好是先咨詢我們的工程師確定,避免不必要的樣品損失。

4.加急試驗周期一般是五個工作日左右,部分樣品有所差異

5.如果對于(斑馬魚試驗檢測)還有什么疑問,可以咨詢我們的工程師為您一一解答。

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