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細(xì)胞增殖檢測(cè)

原創(chuàng)發(fā)布者:北檢院    發(fā)布時(shí)間:2025-04-08     點(diǎn)擊數(shù):

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細(xì)胞增殖檢測(cè):原理、方法與實(shí)驗(yàn)流程

檢測(cè)樣品

細(xì)胞增殖檢測(cè)的樣品主要包括體外培養(yǎng)的細(xì)胞系、原代細(xì)胞、藥物處理后的細(xì)胞樣本以及基因編輯后的細(xì)胞模型。常見的樣品類型涵蓋腫瘤細(xì)胞(如HeLa、A549)、干細(xì)胞、免疫細(xì)胞(如T細(xì)胞)以及經(jīng)特定化合物或生物因子刺激后的細(xì)胞群體。樣品需滿足無菌、活性良好且濃度適宜(通常為1×10^4至1×10^5 cells/mL)的要求。

檢測(cè)項(xiàng)目

細(xì)胞增殖檢測(cè)的核心目標(biāo)是量化細(xì)胞在特定條件下的生長(zhǎng)速率和分裂能力。主要檢測(cè)項(xiàng)目包括:

  1. 細(xì)胞活力分析:評(píng)估細(xì)胞存活率與代謝活性;
  2. 增殖曲線繪制:通過連續(xù)監(jiān)測(cè)細(xì)胞數(shù)量變化,反映增殖動(dòng)力學(xué)特征;
  3. 細(xì)胞周期分布:分析細(xì)胞處于G1、S、G2/M期的比例;
  4. 克隆形成能力:測(cè)定單個(gè)細(xì)胞形成細(xì)胞集落的潛力。

檢測(cè)方法

目前主流的細(xì)胞增殖檢測(cè)方法包括以下四種: 1. CCK-8法 基于水溶性四唑鹽(WST-8)的還原反應(yīng),通過檢測(cè)450 nm波長(zhǎng)處的吸光度值,間接反映活細(xì)胞數(shù)量。該方法操作簡(jiǎn)便,適用于高通量篩選。

2. MTT法 利用MTT試劑被線粒體脫氫酶還原為紫色結(jié)晶物的特性,通過溶解結(jié)晶后測(cè)量570 nm吸光度值,評(píng)估細(xì)胞增殖狀態(tài)。需注意MTT對(duì)細(xì)胞具有毒性,需嚴(yán)格控制孵育時(shí)間。

3. BrdU標(biāo)記法 通過摻入胸腺嘧啶類似物BrdU,結(jié)合特異性抗體與熒光標(biāo)記,定量檢測(cè)DNA合成活躍的細(xì)胞比例。此方法適用于精準(zhǔn)分析S期細(xì)胞占比。

4. 流式細(xì)胞術(shù) 采用碘化丙啶(PI)或DAPI染色,結(jié)合流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞周期分布,或通過CFSE染料追蹤細(xì)胞分裂代數(shù),實(shí)現(xiàn)動(dòng)態(tài)增殖監(jiān)測(cè)。

檢測(cè)儀器

細(xì)胞增殖檢測(cè)依賴以下關(guān)鍵儀器設(shè)備:

  1. 酶標(biāo)儀(如BioTek Synergy H1):用于讀取CCK-8、MTT等試劑的吸光度數(shù)據(jù);
  2. 流式細(xì)胞儀(如BD FACSCanto II):完成細(xì)胞周期分析或CFSE標(biāo)記檢測(cè);
  3. 倒置顯微鏡(如Olympus IX73):觀察細(xì)胞形態(tài)與克隆形成情況;
  4. CO2培養(yǎng)箱(如Thermo Fisher Heracell 150i):維持細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境穩(wěn)定。

總結(jié)

細(xì)胞增殖檢測(cè)是評(píng)估藥物效果、基因功能及環(huán)境因素對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)影響的核心實(shí)驗(yàn)技術(shù)。通過合理選擇檢測(cè)方法與儀器,研究人員能夠高效獲取細(xì)胞增殖的動(dòng)態(tài)數(shù)據(jù),為腫瘤學(xué)、免疫學(xué)及再生醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域的研究提供關(guān)鍵支持。


復(fù)制
導(dǎo)出
重新生成

實(shí)驗(yàn)儀器

實(shí)驗(yàn)室儀器 實(shí)驗(yàn)室儀器 實(shí)驗(yàn)室儀器 實(shí)驗(yàn)室儀器

測(cè)試流程

細(xì)胞增殖檢測(cè)流程

注意事項(xiàng)

1.具體的試驗(yàn)周期以工程師告知的為準(zhǔn)。

2.文章中的圖片或者標(biāo)準(zhǔn)以及具體的試驗(yàn)方案僅供參考,因?yàn)槊總€(gè)樣品和項(xiàng)目都有所不同,所以最終以工程師告知的為準(zhǔn)。

3.關(guān)于(樣品量)的需求,最好是先咨詢我們的工程師確定,避免不必要的樣品損失。

4.加急試驗(yàn)周期一般是五個(gè)工作日左右,部分樣品有所差異

5.如果對(duì)于(細(xì)胞增殖檢測(cè))還有什么疑問,可以咨詢我們的工程師為您一一解答。

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