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穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞檢測(cè)

原創(chuàng)發(fā)布者:北檢院    發(fā)布時(shí)間:2025-04-08     點(diǎn)擊數(shù):

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注意:因業(yè)務(wù)調(diào)整,暫不接受個(gè)人委托測(cè)試望見(jiàn)諒。

穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞檢測(cè)技術(shù)流程與應(yīng)用

檢測(cè)樣品

穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞檢測(cè)的樣品主要為經(jīng)過(guò)基因工程改造的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞系,例如HEK293、CHO、HeLa等常見(jiàn)哺乳動(dòng)物細(xì)胞系。樣品需滿(mǎn)足以下條件:

  1. 細(xì)胞狀態(tài)良好,活率≥90%;
  2. 轉(zhuǎn)染基因穩(wěn)定整合至基因組并通過(guò)篩選(如抗生素篩選);
  3. 傳代次數(shù)控制在20代以?xún)?nèi),避免基因沉默或表達(dá)不穩(wěn)定。

檢測(cè)項(xiàng)目

穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞檢測(cè)的核心項(xiàng)目包括:

  • 基因表達(dá)水平:檢測(cè)外源基因的轉(zhuǎn)錄活性;
  • 蛋白表達(dá)水平:定量或定性分析目標(biāo)蛋白的表達(dá)量與功能;
  • 細(xì)胞活力與增殖能力:評(píng)估穩(wěn)轉(zhuǎn)對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響;
  • 抗生素抗性驗(yàn)證:確認(rèn)篩選標(biāo)記基因的有效性;
  • 長(zhǎng)期穩(wěn)定性:分析目標(biāo)基因在連續(xù)傳代中的表達(dá)一致性。

檢測(cè)方法

1. 基因表達(dá)水平檢測(cè)

采用**實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qPCR)**技術(shù),通過(guò)特異性引物擴(kuò)增目標(biāo)基因,以?xún)?nèi)參基因(如GAPDH)為對(duì)照,計(jì)算相對(duì)表達(dá)量。

2. 蛋白表達(dá)水平檢測(cè)

  • Western Blot:通過(guò)SDS-PAGE分離蛋白,轉(zhuǎn)膜后使用特異性抗體檢測(cè)目標(biāo)蛋白;
  • 流式細(xì)胞術(shù):針對(duì)表面蛋白或熒光標(biāo)記蛋白,定量分析表達(dá)陽(yáng)性細(xì)胞比例。

3. 細(xì)胞活力與增殖檢測(cè)

  • CCK-8法:通過(guò)檢測(cè)細(xì)胞代謝活性間接反映增殖能力;
  • 細(xì)胞計(jì)數(shù)與形態(tài)觀(guān)察:結(jié)合臺(tái)盼藍(lán)染色評(píng)估活細(xì)胞比例。

4. 長(zhǎng)期穩(wěn)定性檢測(cè)

連續(xù)傳代培養(yǎng)后,定期取樣檢測(cè)目標(biāo)基因或蛋白的表達(dá)水平,繪制穩(wěn)定性趨勢(shì)圖。

檢測(cè)儀器

  1. 實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀(如Bio-Rad CFX96):用于基因表達(dá)定量分析;
  2. 酶標(biāo)儀(如Thermo Scientific Multiskan GO):讀取CCK-8、熒光素酶報(bào)告基因等吸光度或熒光信號(hào);
  3. 流式細(xì)胞儀(如BD FACSCelesta):高通量分析蛋白表達(dá)及細(xì)胞分選;
  4. 蛋白電泳系統(tǒng)(如Bio-Rad Mini-PROTEAN):完成Western Blot的凝膠制備與電泳;
  5. 細(xì)胞培養(yǎng)箱(如Thermo Scientific Heracell 150i):提供恒溫恒濕的細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境。

總結(jié)

穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞檢測(cè)是基因功能研究、藥物篩選及生物制品開(kāi)發(fā)的關(guān)鍵技術(shù)。通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)化的檢測(cè)流程與先進(jìn)儀器,可確保實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性和可重復(fù)性,為后續(xù)研究提供可靠依據(jù)。

作者:生物檢測(cè)中心 | 發(fā)布時(shí)間:2023年10月

實(shí)驗(yàn)儀器

實(shí)驗(yàn)室儀器 實(shí)驗(yàn)室儀器 實(shí)驗(yàn)室儀器 實(shí)驗(yàn)室儀器

測(cè)試流程

穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞檢測(cè)流程

注意事項(xiàng)

1.具體的試驗(yàn)周期以工程師告知的為準(zhǔn)。

2.文章中的圖片或者標(biāo)準(zhǔn)以及具體的試驗(yàn)方案僅供參考,因?yàn)槊總€(gè)樣品和項(xiàng)目都有所不同,所以最終以工程師告知的為準(zhǔn)。

3.關(guān)于(樣品量)的需求,最好是先咨詢(xún)我們的工程師確定,避免不必要的樣品損失。

4.加急試驗(yàn)周期一般是五個(gè)工作日左右,部分樣品有所差異

5.如果對(duì)于(穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞檢測(cè))還有什么疑問(wèn),可以咨詢(xún)我們的工程師為您一一解答。

  • 服務(wù)保障 一對(duì)一品質(zhì)服務(wù)
  • 定制方案 提供非標(biāo)定制試驗(yàn)方案
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  • 全國(guó)取樣/寄樣 全國(guó)上門(mén)取樣/寄樣/現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)