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注意：因業(yè)務(wù)調(diào)整，暫不接受個(gè)人委托測試望見諒。

細(xì)胞熱轉(zhuǎn)變檢測技術(shù)及其應(yīng)用

細(xì)胞熱轉(zhuǎn)變檢測（Cellular Thermal Shift Assay, CETSA）是一種基于蛋白質(zhì)熱穩(wěn)定性變化的功能性分析技術(shù)，廣泛應(yīng)用于藥物開發(fā)、靶點(diǎn)驗(yàn)證及疾病機(jī)制研究等領(lǐng)域。該技術(shù)通過監(jiān)測溫度變化對細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)構(gòu)象的影響，揭示藥物與靶蛋白的結(jié)合情況。以下為檢測流程的核心內(nèi)容。

一、檢測樣品

細(xì)胞熱轉(zhuǎn)變檢測的樣品類型主要包括：

1. 體外培養(yǎng)細(xì)胞：如腫瘤細(xì)胞系（Hela、A549）、干細(xì)胞、原代細(xì)胞等。
2. 組織樣本：通過機(jī)械破碎或酶解法提取的動(dòng)物或人體組織細(xì)胞。
3. 重組蛋白溶液：純化后的特定蛋白樣品，用于對照實(shí)驗(yàn)。

二、檢測項(xiàng)目

檢測涵蓋以下關(guān)鍵指標(biāo)：

1. 細(xì)胞熱穩(wěn)定性分析：評估目標(biāo)蛋白在不同溫度下的構(gòu)象變化。
2. 藥物-靶蛋白結(jié)合驗(yàn)證：檢測藥物處理后蛋白熱穩(wěn)定性的改變，確認(rèn)結(jié)合活性。
3. 變性溫度（Tm值）測定：確定目標(biāo)蛋白發(fā)生不可逆變性的臨界溫度。
4. 熱誘導(dǎo)蛋白聚集或降解分析：研究溫度對蛋白穩(wěn)定性的長期影響。

三、檢測方法

1. 樣品預(yù)處理：細(xì)胞或組織經(jīng)裂解緩沖液處理后，分裝至多孔板中，設(shè)置溫度梯度（如37°C至70°C）。
2. 熱應(yīng)激處理：將樣品置于精確控溫設(shè)備中孵育，誘導(dǎo)蛋白質(zhì)變性。
3. 離心分離：去除熱變性沉淀的蛋白，保留可溶性蛋白。
4. 蛋白定量：采用Western Blot、ELISA或質(zhì)譜技術(shù)分析目標(biāo)蛋白含量。
5. 數(shù)據(jù)分析：通過軟件計(jì)算Tm值，繪制熱穩(wěn)定性曲線，評估藥物結(jié)合效應(yīng)。

四、檢測儀器

1. 差示掃描量熱儀（DSC）：用于高精度測定蛋白變性溫度。
2. 實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀：部分實(shí)驗(yàn)通過熒光染料（如SYPRO Orange）監(jiān)測蛋白變性過程。
3. 多功能酶標(biāo)儀：配合化學(xué)發(fā)光或熒光檢測試劑完成高通量蛋白定量。
4. 離心機(jī)與恒溫孵育箱：實(shí)現(xiàn)樣品快速分離及精準(zhǔn)溫控。

五、技術(shù)優(yōu)勢

細(xì)胞熱轉(zhuǎn)變檢測具有靈敏度高、適用范圍廣的特點(diǎn)，可同時(shí)分析活細(xì)胞及無細(xì)胞體系。其數(shù)據(jù)可直接反映藥物與靶蛋白的結(jié)合能力，為藥物篩選提供可靠依據(jù)。目前，該技術(shù)已成功應(yīng)用于激酶抑制劑、抗癌藥物及免疫調(diào)節(jié)劑的研發(fā)中。

通過細(xì)胞熱轉(zhuǎn)變檢測，研究人員能夠從分子層面解析藥物作用機(jī)制，加速精準(zhǔn)醫(yī)療與個(gè)性化治療方案的開發(fā)。隨著自動(dòng)化設(shè)備的普及，該技術(shù)將進(jìn)一步推動(dòng)生命科學(xué)領(lǐng)域的創(chuàng)新突破。

實(shí)驗(yàn)儀器

測試流程

注意事項(xiàng)

1.具體的試驗(yàn)周期以工程師告知的為準(zhǔn)。

2.文章中的圖片或者標(biāo)準(zhǔn)以及具體的試驗(yàn)方案僅供參考，因?yàn)槊總€(gè)樣品和項(xiàng)目都有所不同，所以最終以工程師告知的為準(zhǔn)。

3.關(guān)于（樣品量）的需求，最好是先咨詢我們的工程師確定，避免不必要的樣品損失。

4.加急試驗(yàn)周期一般是五個(gè)工作日左右，部分樣品有所差異

5.如果對于（細(xì)胞熱轉(zhuǎn)變檢測）還有什么疑問，可以咨詢我們的工程師為您一一解答。