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細(xì)胞內(nèi)過(guò)氧化氫檢測(cè)

原創(chuàng)發(fā)布者:北檢院    發(fā)布時(shí)間:2025-04-08     點(diǎn)擊數(shù):

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注意:因業(yè)務(wù)調(diào)整,暫不接受個(gè)人委托測(cè)試望見諒。

細(xì)胞內(nèi)過(guò)氧化氫檢測(cè)實(shí)驗(yàn)方法與應(yīng)用

檢測(cè)樣品 本次實(shí)驗(yàn)的檢測(cè)樣品為體外培養(yǎng)的哺乳動(dòng)物細(xì)胞(如HeLa細(xì)胞、HEK293細(xì)胞等)。樣品需在標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞培養(yǎng)條件下(37℃、5% CO?)傳代培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期,實(shí)驗(yàn)前需根據(jù)研究目的對(duì)細(xì)胞進(jìn)行特定處理(如氧化應(yīng)激誘導(dǎo)、藥物干預(yù)或基因編輯)。

檢測(cè)項(xiàng)目 實(shí)驗(yàn)主要針對(duì)細(xì)胞內(nèi)過(guò)氧化氫(H?O?)的含量進(jìn)行定量或定性分析。過(guò)氧化氫是細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS)的重要成員,其濃度變化與氧化應(yīng)激、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及疾病發(fā)生密切相關(guān)。檢測(cè)項(xiàng)目還可拓展至H?O?的亞細(xì)胞定位或與其他生物分子的相互作用。

檢測(cè)方法

  1. 熒光探針?lè)?/strong>:采用DCFH-DA(2&39;,7&39;-二氯二氫熒光素二乙酸酯)作為熒光探針。DCFH-DA可穿透細(xì)胞膜,在細(xì)胞內(nèi)酯酶作用下水解生成DCFH;后者與H?O?反應(yīng)生成具有熒光的DCF,熒光強(qiáng)度與H?O?濃度呈正相關(guān)。
  2. 化學(xué)發(fā)光法:基于魯米諾(Luminol)或其衍生物與H?O?在辣根過(guò)氧化物酶(HRP)催化下的化學(xué)發(fā)光反應(yīng),通過(guò)光信號(hào)強(qiáng)度間接反映H?O?水平。
  3. 酶聯(lián)法:利用特定酶(如過(guò)氧化氫酶)分解H?O?,通過(guò)檢測(cè)底物消耗或產(chǎn)物生成實(shí)現(xiàn)定量分析。

檢測(cè)儀器

  1. 熒光顯微鏡或共聚焦顯微鏡:用于觀察H?O?在細(xì)胞內(nèi)的實(shí)時(shí)分布及動(dòng)態(tài)變化(如Nikon Eclipse Ti或Zeiss LSM 880)。
  2. 酶標(biāo)儀:適用于高通量樣本的熒光強(qiáng)度或吸光度檢測(cè)(如BioTek Synergy H1)。
  3. 流式細(xì)胞儀:實(shí)現(xiàn)單細(xì)胞水平H?O?的快速定量分析(如BD FACSCanto II)。
  4. 化學(xué)發(fā)光檢測(cè)儀:專用于化學(xué)發(fā)光信號(hào)的捕獲與分析(如Berthold Centro XS3)。

實(shí)驗(yàn)流程概述

  1. 樣品制備:細(xì)胞經(jīng)處理后洗滌并重懸于緩沖液。
  2. 探針加載:加入DCFH-DA(終濃度10 μM),37℃避光孵育20-30分鐘。
  3. 信號(hào)檢測(cè):根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求選擇顯微鏡觀察或儀器定量分析。
  4. 數(shù)據(jù)分析:通過(guò)軟件(如ImageJ或FlowJo)處理熒光信號(hào),結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算H?O?濃度。

注意事項(xiàng)

  • 避免探針長(zhǎng)時(shí)間光照或反復(fù)凍融。
  • 需設(shè)置空白對(duì)照組及陽(yáng)性對(duì)照(如H?O?刺激組)。
  • 化學(xué)發(fā)光法需嚴(yán)格控制反應(yīng)時(shí)間及溫度。

應(yīng)用領(lǐng)域 本方法廣泛用于氧化應(yīng)激機(jī)制研究、抗氧化藥物篩選、癌癥及神經(jīng)退行性疾病模型構(gòu)建等領(lǐng)域,為揭示H?O?的生物學(xué)功能提供可靠技術(shù)支撐。

關(guān)鍵詞:細(xì)胞內(nèi)過(guò)氧化氫、熒光探針、DCFH-DA、活性氧檢測(cè)、氧化應(yīng)激

通過(guò)上述方法,研究人員可高效、精準(zhǔn)地評(píng)估細(xì)胞內(nèi)H?O?水平,為疾病機(jī)制探索及治療策略開發(fā)提供重要實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

實(shí)驗(yàn)儀器

實(shí)驗(yàn)室儀器 實(shí)驗(yàn)室儀器 實(shí)驗(yàn)室儀器 實(shí)驗(yàn)室儀器

測(cè)試流程

細(xì)胞內(nèi)過(guò)氧化氫檢測(cè)流程

注意事項(xiàng)

1.具體的試驗(yàn)周期以工程師告知的為準(zhǔn)。

2.文章中的圖片或者標(biāo)準(zhǔn)以及具體的試驗(yàn)方案僅供參考,因?yàn)槊總€(gè)樣品和項(xiàng)目都有所不同,所以最終以工程師告知的為準(zhǔn)。

3.關(guān)于(樣品量)的需求,最好是先咨詢我們的工程師確定,避免不必要的樣品損失。

4.加急試驗(yàn)周期一般是五個(gè)工作日左右,部分樣品有所差異

5.如果對(duì)于(細(xì)胞內(nèi)過(guò)氧化氫檢測(cè))還有什么疑問(wèn),可以咨詢我們的工程師為您一一解答。

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